在动物体内,神经肽是一种种类最多的神经递质和神经调质,神经肽的受体大多数为G蛋白偶联受体,它们在行为的神经环路机制中至关重要。但目前为止,关于神经肽受体的功能研究相对较少。Jing等在2010年鉴定出了海兔促咽侧体素相关神经肽(Aplysia allatotropin-related peptide,ap ATRP)的前体,ap ATRP广泛分布于海兔的摄食环路,它的一种主要作用是增强位于口神经节的运动神经元B61/B62的兴奋性。最近,我们的合作者James W.Checco博士通过生物信息学方法鉴定并克隆了海兔神经肽ap ATRP的受体ap ATRPR,并在全L型氨基酸组成的ap ATRP(L-ap ATRP)外鉴定出了一种含D型氨基酸的ap ATRP(D2-ap ATRP),随后他在细胞系水平表达ap ATRPR并证明了Lap ATRP和D2-ap ATRP可以激活ap ATRPR,我们的目标是在海兔体内进一步证明ap ATRPR是ap ATRP的受体。由此,我们希望鉴定海兔神经元中ap ATRPR的功能。首先,我们发现Lap ATRP和D2-ap ATRP都可以增强B61/B62的兴奋性,这与细胞系的实验结果一致,我们由此猜想ap ATRPR可能介导L-ap ATRP和D2-ap ATRP的生理功能。为了进一步验证我们的猜想,我们先要将ap ATRPR在本不表达ap ATRPR的神经元上表达且证明此神经元表达ap ATRPR后对L-ap ATRP的兴奋性反应增强。我们发现B1/B2神经元对L-ap ATRP无兴奋性增强反应。接着我们需要一种可以在海兔B1/B2神经元中表达外源基因ap ATRPR的质粒载体,我们的另一位合作者Bong-Kiun Kaang教授向我们提供了这样的的质粒载体p NEX3,我们由此构建质粒p NEX3-ap ATRPR和p NEX3-EGFP并扩增。随后,我们将B1/B2分为对照组和实验组,对照组仅注射p NEX3-EGFP溶液,实验组注射p NEX3-ap ATRPR和p NEX3-EGFP溶液,培养1-3天后,若产生绿色荧光,则表明EGFP的表达,这提示在实验组中ap ATRPR的共表达。我们对产生绿色荧光的B1/B2神经元进行L-ap ATRP兴奋性实验。兴奋性实验发现实验组的B1/B2神经元对L-ap ATRP兴奋性反应增强,而对照组无兴奋性增强反应。因此,我们在海兔体内直接证明了ap ATRPR对L-ap ATRP的兴奋性增强反应的充分性。将来我们计划通过抑制神经元B61/B62中内源性表达的ap ATRPR的表达来验证兴奋性增强反应的必要性。