猪链球菌耐药毒力相关性分析及耐药基因的流行性研究

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猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人畜共患病,可以对人类和畜牧业造成严重的危害。本文对华南地区分离的猪链球菌进行了耐药表型、血清型、毒力因子和耐药基因的调查,旨在阐明华南地区猪链球菌耐药性与耐药基因的流行情况,同时分析了抗菌药耐药和毒力特征的相关性,以期对此病原菌耐药性的风险评估和耐药性的防控提供一定的理论依据。  采用琼脂稀释法测定了2008~2010年期间临床采集的186株猪链球菌对临床常用的11种抗菌药物的最小抑菌浓度。结果表明猪链球菌对临床常用的多种药物均呈现出不同程度的耐药性。其中,耐药率较为严重的是红霉素、阿奇霉素、氯霉素、氟苯尼考、四环素、克林霉素和替米考星,其耐药率依次为95.16%、94.09%、88.17%、88.17%、87.10%、83.33%和80.65%。其余耐药率较高的为氨苄西林、左氧氟沙星和头孢噻呋,其耐药率分别为71.00%、60.21%和58.06%,而卡那霉素较为敏感,其耐药率为48.92%。同时,菌株中多重耐药的现象十分严重,186株菌均呈现出2~11耐的耐药现象,其中53株菌(28.49%)表现出11耐的现象。  用PCR方法对猪链球菌中的常见血清型进行了筛选。在186株猪链球菌中,24株(12.90%)没有成功分型,其他菌株的血清型中以2型的检出率最高(56.45%),其他血清型依次为1型(27.96%)、7型(1.61%)和9型(1.08%)。而毒力因子中,以mrp的阳性率最高(52.23%),其他两个毒力因子sly和ef的检出率分别为48.92%和39.78%。运用SPSS软件对耐药表型和血清型、毒力因子的相关性进行了统计分析。结果表明,血清型和耐药表型存在着一定的相关性,其中1型与克林霉素和氯霉素的敏感表型显著相关,2型与氯霉素、氟苯尼考的耐药表型、头孢噻呋、氨苄西林和四环素的敏感表型显著相关,7型与氯霉素的敏感表型显著相关,而未定型菌株则和左氧氟沙星和卡那霉素的耐药表型显著相关。对于耐药表型和毒力因子的相关性研究表明,这三个毒力因子的阳性均与氯霉素的耐药表型显著相关。此外,mrp基因与左氧氟沙星、四环素、阿奇霉素、头孢噻呋、卡那霉素、氨苄西林的敏感表型显著相关;ef基因与左氧氟沙星、四环素、头孢噻呋与氨苄西林的敏感表型显著相关;而sly基因则与左氧氟沙星、四环素和阿奇霉素的敏感表型显著相关。在国内首次证明了猪链球菌的耐药表型和血清型、毒力因子之间存在着一定的相关性。  对临床分离菌株采用双纸片法测定其对于大环内酯类-林可酰胺类的耐药表型,结果表明内在型耐药表型(cML)在受试菌株中为主。运用PCR方法检测相关的耐药基因,结果表明受试菌株中以erm(B)基因介导的甲基化作用为主导作用。在大环内酯类耐药菌株中,erm(B)基因的检出率最高(64.97%),其他耐药基因的检出率依次为erm(A)(38.42%)、msr(D)(32.77%)、mph(A)(36.72%)、mef(A)(30.51%)、ere(A)(27.68%)和mph(C)(9.04%)。而在155株克林霉素的耐药菌株中,除未检测到lnu(C)和lnu(D)基因外,其他耐药基因的检出率依次为:lsa(A)(21.94%)、lnu(F)(23.23%)、lnu(B)(21.29%)、lsa(B)(19.35%)、lnu(A)(12.90%)和lsa(C)(1.94%)。  在四环素耐药菌株中,携带tet(B)基因(45.06%)的菌株数量最多,其他耐药基因的检出率依次为tet(O)(38.89%)、tet(L)(33.33%)、tet(M)(19.14%)、tet(S)(17.90%)、tet(W)(4.94%)、tet(C)(1.23%)和tet(K)(0.62%)。在大环内酯类与四环素类共同耐药的菌株中,29株同时携带erm(B)-tet(M)基因,27株同时携带erm(A)-tet(O)基因,20株同时携带erm(A)-mef(A)基因,8株同时携带erm(A)-tet(O)-mef(A)基因。在29株同时携带erm(B)和tet(M)基因的菌株中进行了Tn916相关的转座子的检测,发现4株菌同时携带Tn6002+Tn6003。其它携带单个转座子的情况为:14株菌携带Tn6003,5株菌携带Tn1116,4株菌携带Tn6002,2株菌携带Tn3872。这表明,Tn916相关的转座子在大环内酯类与四环素类耐药的菌株中普遍存在,并且对大环内酯类与四环素类耐药性的共同传播具有促进作用。  在氟苯尼考耐药菌株中对耐药基因cfr和fex(A)进行了检测。结果发现,在164株氟苯尼考耐药的猪链球菌中,14株菌携带cfr基因,48株菌携带fex(A)基因。在这些菌中,有7株菌同时携带这两个基因。在猪链球菌中首次检测到cfr和fex(A)基因。  上述结果表明,华南地区的猪链球菌耐药性十分严重,大环内酯类、林可酰胺类、四环素类的耐药基因多呈现出一种联合作用的方式,同时猪链球菌中血清型和耐药表型、毒力因子与耐药表型之间存在着显著的相关性。
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