凉血愈肠汤对大鼠放射性肠炎肠黏膜修复机制研究

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目的腹盆腔肿瘤的治疗方法有很多种,放射治疗是其中一种最重要方法,但放疗在治疗疾病的同时也会出现一些如放射性肠炎这样的并发症,急性期的表现是消化道出血及腹泻,是由于放射线破坏了黏膜上皮细胞完整性,引起细胞功能发生紊乱;慢性期的表现是瘘管、肠梗阻及溃疡,是由于肠壁硬化造成的。目前对放射性肠炎的治疗方法包括:①肠粘膜保护剂:如硫糖铝、思密达等。但总体疗效并不确切;②肠外营养:谷氨酰胺及肠外营养具有一定疗效,但费用高昂,且存在导管脓毒血症、肝功能损害、代谢紊乱等并发症;③高压氧治疗:可增加损伤肠道供氧,促进损伤修复,但高压氧治疗需要特殊大型设备,难于在战时条件下迅速、大量配备使用;④內镜及手术治疗:內镜治疗仅限于对症局部止血作用,严重患者最终只能接受手术,切除病变肠段;⑤中医药治疗:在我国传统医学中,针灸及中药汤剂对于胃肠道疾病是一种非常重要的治疗方法。国内已有少数研究报道了中药对放射性肠炎具有较好疗效,能有效缓解各种症状,促进机体康复。但多数限于临床疗效观察,缺乏组织学、细胞学、分子水平的深入研究。本课题拟在既往工作的基础上,进一步建立核辐射肠损伤的大鼠模型,从组织学、分子水平、细胞学三方面研究凉血愈肠汤对放射性肠损伤的治疗作用,明确其作用机制。方法1、放射性肠炎模型大鼠的分组及准备随机将140只雄性SD大鼠按照放射剂量的不同分为4组,A组为正常对照组(n=20)、B组为低剂量照射组(n=40),给予放射当量为5Gy、C组为中剂量照射组(n=40),给予放射当量为10Gy、D组即15Gy剂量照射组(n=40),建成辐射肠损伤模型。2、分组造模成功后, B、C、D实验组再随机分为两组,B1、C1、D1组为照射后不给药组,给予蒸馏水灌胃, B2、C2、D2组为照射后给药组,予喂凉血愈肠汤。3、免疫组织化学方法检测各组大鼠肠上皮细胞PCNA及Ki67的表达情况通过SP免疫组化试剂盒的操作说明对石蜡切片的PCNA7及Ki67进行染色。4、Brdu法检测肠上皮细胞的增殖在各组大鼠处死之前,经腹腔向大鼠注射Brdu溶液,然后按照相同的方法制备石蜡切片,通过免疫组织化学方法对Brdu阳性细胞进行标记。6、荧光实时定量Real-time PCR法分析各组组织中的炎症因子的表达变化处死各组大鼠后,取少量组织,用trizol法提取总RNA,用SYBR Green法检测IL-6、IL-8、IL-1、TNF-ɑ、IL-4、IL-10的表达变化结果1、大鼠小肠粘膜上皮细胞修复能力检测正常肠绒毛根部及肠腺可见大量散在PCNA阳性细胞。模型组的肠绒毛上皮细胞及肠腺上皮的PCNA表达明显减少,凉血愈肠汤给药处理后,肠绒毛上皮细胞及肠腺上皮的PCNA表达较模型对照组明显增多,但是少于正常肠绒毛上皮细胞及肠腺细胞。2、Brdu检测肠粘膜上皮中处于S期的细胞数量正常肠绒毛及肠腺可见大量散在Brdu标记的阳性细胞(S期细胞),模型组中Brdu标记的阳性细胞数明显降低,凉血愈肠汤给药处理后,Brdu标记的阳性细胞数明显对照组明显增多,但是少于正常肠绒毛中Brdu标记的阳性上皮细胞。3、荧光实时定量Real-time PCR法分析各组组织中的炎症因子的表达变化正常大鼠的肠组织中,IL-6、IL-8、IL-1、TNF-ɑ、等炎症因子表达量很少,模型大鼠中,各种因子的表达量明显增多,凉血愈肠汤给药处理后,模型大鼠肠组织中的IL-4、IL-10的表达量较不给药组明显升高,但是低于正常大鼠的表达量。结论凉血愈肠汤可以使受损肠道的黏膜得到修复,原理是使受损肠道的粘膜上皮细胞增殖加速,炎性因子的表达得到遏制,对维持肠道粘膜功能和结构的稳定性能起到良好的作用。
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