中国林蛙在分类学上属于脊索动物门、脊椎动物亚门、两栖纲、无尾目、蛙科、林蛙属,俗称哈士蟆、黄蛤蟆等,医学上称之为田鸡。中国林蛙具有重要经济意义和医疗保健价值。其干制全体入药,历代本草均有记载。雌蛙输卵管干制品入药,称哈士蟆油或哈蟆油,也称“田鸡油”,为名贵的动物药材。现在市场上作为哈蟆油商品的,从商品形式上分,有干燥原只和已剥好的油(雌蛙输卵管)两种。现在市场上有类似品黑龙江林蛙,伪品黑斑蛙和蟾蜍。该药材鉴定目前仍主要依据性状特点、显微特征、理化性质等,但由于该药材缺乏明显的形态鉴别特征和特殊的化学成分,实践中哈蟆油的鉴定仍感到十分困难。为了使不法商贩无利可徒,保护消费者权益,本研究设计了五对引物对四个物种进行PCR扩增,看四个物种扩增产物的区别,从而对其进行分子鉴别。如何有效地控制性比是林蛙养殖业中一个有待解决的问题。为了从根本上解决这个问题,我们首先必须知道雌雄个体间的差异及遗传背景。此外,两栖类动物处于进化的中间过渡位置,在高等动物中能看到异型性染色体,而在低等动物中不能,因此,就有可能从两栖类中找到过渡类型,为研究染色体的演化提供一些理论帮助。所以本实验设计了七对引物和一个引物组合对其进行PCR扩增,根据雌雄扩增结果的差别,从而达到性别鉴定的目的,为中国林蛙的性别研究提供遗传依据。两栖类的系统进化关系的研究,主要依据宏观形态学和染色体学来分析物种的亲源关系是不够的。由于分子系统学及DNA分子技术的快速发展,使从DNA水平研究两栖类物种的亲源关系成为可能。随着mtDNA序列的大量积累,人们越来越迫切的想得到核DNA的信息,来对mtDNA的资料进行补充。所以本实验对四个物种用第四对引物PCR扩增的产物进行克隆测序,结果进行BLAST分析,以期为探讨两栖类性别决定基因和系统发育提供分子依据。本研究结论如下:1.用第四对引物(根据WZ染色体上的EcoRI家族设计)进行中国林蛙伪品鉴别,中国林蛙扩增843bp的特征带。黑龙江林蛙有223bp的特征带,黑斑蛙有434bp的特征带,蟾蜍有704bp的特征带。第五对引物(根据牛SRY基因设计)可以对药源林蛙种间进行分子鉴别。中国林蛙有250bp的特征带;黑龙江林蛙有550bp、750bp、1400bp的特征带。2. CHD1+2引物组合可以对中国林蛙进行性别鉴定,雌性有600bp的雌性特异带。3.根据鸡WZ染色体上的EcoRI家族重复序列设计的第四对引物,对四个物种扩增序列克隆测序,将所获得结果进行BLAST比较分析发现:黑斑蛙的这段序列与鸡的同源性达到98%,而与其他三个物种的同源性都很低。