二肽基肽酶Ⅳ(dipeptidyl peptidaseⅣ, DPP-Ⅳ; EC3.4.14.5/CD26)属于丝氨酸肽酶中脯氨酸寡肽酶家族成员之一,是目前糖尿病新药研发的热点之一。体内外研究显示胰高血糖素样肽-1(GLP-1)具有较好的抗糖尿病效应,但是由于其体内被以DPP-Ⅳ为主的酶降解,半衰期仅2 min,因而限制了其在临床上的应用。研究表明DPP-Ⅳ抑制剂能延长GLP-1在体内的半衰期,从而有效地降低血糖。目前已有多个化合物进入二期、三期临床实验,甚至上市销售。本文从中药入手筛选在体外体内对DPP-Ⅳ有抑制作用的药物,为今后获得具有抑制DPP-Ⅳ功能的新结构化学物打下基础。以Gly-Pro-PNA为反应底物,采用发色底物法检测DPP-Ⅳ的活性,建立DPP-Ⅳ抑制剂的体外筛选模型。实验对酶量、底物浓度、最佳温度、pH及反应时间进行了优化结果为:酶量为0.5 U/L、底物浓度为0.262μmol/L、温度37℃、pH 8.2时可获最大酶活性。在此基础上以抑二肽素A(IIe-Pro-IIe)为阳性药物,进一步证实了该模型的可行性。建立了具有323味中药的天然药用植物库。应用上述已建立模型对中药进行筛选,得到了在体外具有DPP-Ⅳ活性抑制作用的三种中药水蛭,茯神,密蒙花,三者的抑制作用均与药物浓度呈正相关,其中同浓度下密蒙花的抑制率最高。通过观察四氧嘧啶造模糖尿病小鼠的生理状态、血糖等方面考察了这三种中药的降糖作用,并进一步考察了水蛭、密蒙花两种中药对四氧嘧啶型糖尿病小鼠糖耐量及血清胰岛素和GLP-1水平的影响。结果表明水蛭,密蒙花在体内具有一定的降血糖作用,其作用途径可能是通过抑制DPP-Ⅳ活性起作用,而茯神在体内则无明显的降血糖作用。