【摘 要】
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不孕不育是全球范围内被重点关注的公共卫生问题,而精子发生异常是男性不育的重要病因。精子发生可分为精原细胞的有丝分裂、减数分裂以及精子变形三个阶段。其中减数分裂是特殊的细胞分裂,是生物繁育中最基础的一环。在本课题中,基于前人的研究,我们注意到睾丸特异性蛋白MAPS,它从减数分裂的粗线期开始表达,缺失后导致雄鼠不育,但是MAPS参与减数分裂的分子机制仍还有很多未知值得深入探究。在本研究中,我们计划通过
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不孕不育是全球范围内被重点关注的公共卫生问题,而精子发生异常是男性不育的重要病因。精子发生可分为精原细胞的有丝分裂、减数分裂以及精子变形三个阶段。其中减数分裂是特殊的细胞分裂,是生物繁育中最基础的一环。在本课题中,基于前人的研究,我们注意到睾丸特异性蛋白MAPS,它从减数分裂的粗线期开始表达,缺失后导致雄鼠不育,但是MAPS参与减数分裂的分子机制仍还有很多未知值得深入探究。在本研究中,我们计划通过构建减数分裂酵母基因文库,在酵母中以酵母双杂交的方法,筛选MAPS的互作蛋白,以此推测MAPS在减数分裂中潜在的功能通路。首先,当我们将BD-MAPS转化到酵母中,发现MAPS全长对酵母的生长具有抑制性,而去掉C端5个氨基酸后,抑制性明显降低。此外,MAPS还存在转录激活活性。为继续筛选计划,我们构建MAPS不同片段的截短突变体,发现MAPS aa1-170不存在自激活,而aa170-190即具有转录激活活性,并且发现MAPS aa170-240为MAPS完整的转录激活域。其次,我们构建了涵括90个重组质粒的减数分裂酵母基因文库,并对MAPS aa1-170进行文库筛选,由此筛选到互作蛋白HORMAD2。通过体外蛋白实验、动物细胞实验进行验证,证明MAPS与HORMAD2存在互作关系。在细胞实验中,我们还发现MAPS aa1-170在细胞核中的定位信号相对全长明显减少。综上所述,我们认为MAPS在雄性减数分裂中具有重要的作用,并提出猜测:MAPS可能是转录因子,并且通过与HORMAD2的互作,参与粗线期交换、MSCI事件的发生。本研究为进一步阐明MAPS在减数分裂中的作用拓宽新的思路与可能性,为精子发生的失败探寻新方向,也为临床上不育的治疗提供基础理论依据。
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