RepSox诱导牛成纤维细胞向脂肪细胞分化的研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:dragon624
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已有研究证明,小分子化合物RepSox可上调mESCs的BMP-3水平,促进高效重编程。BMP-2. BMP-4具有诱导C3H10T1/2细胞向前脂肪细胞定向,经诱导可分化为成熟脂肪细胞的能力。本研究将成纤维细胞定向分化为脂肪细胞,可为脂肪组织工程种子细胞的获得和研究,提供重要的实验参考。实验应用显微观察、分子生物学技术、流式细胞检测技术、免疫组织化学等手段,分析定向分化过程中BMP通路启动情况,细胞处理前后的周期及凋亡现象,增殖能力和细胞微丝骨架的变化情况,并首次从组蛋白修饰的角度研究细胞向前脂肪细胞定向的过程。实验结果:(1)15μM RepSox处理荷斯坦牛成纤维细胞3d,BMP2、Smadl、Smad2、 Smad4表达量相对最高,微丝骨架结构调整,逐渐以长线状平行排列,可作为处理细胞条件;(2)处理组与对照组相比,细胞周期G0/G1期比例减少,S+G2/M期比例增加;染色体核型及细胞增殖能力正常;细胞H3S10磷酸化水平上升了95.6%、S28减弱了26.3%、H3K9甲基化水平上升了74.7%、H3K27甲基化水平下降了47.4%、H3K9乙酰化水平减弱了64.8%;(3)RepSox处理3d的细胞,更换含10%FBS+0.5mM IBMX+10μg/ml胰岛素+1.0gM地塞米松+200μM吲哚美辛的标准培养液诱导14天,成功向脂肪细胞定向分化,BMP2、Smadl、Smad2、Smad4基因开始沉默。成脂诱导2d时表达422/aP2基因,细胞数量增加至RepSox处理2d时的2.79倍。RepSox通过激活BMP通路上游受体BMPRIA、BMPRIB,下游信号分子P-Smad3、ID1等启动整个通路的活性。结论:RepSox具有启动BMP通路,促进成纤维细胞向前脂肪细胞定向,经标准诱导分化为成熟脂肪细胞的能力。
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