陕西省H1N1猪流感病毒的分离鉴定及全基因序列分析

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猪流感(SI)是猪群难以根除的群发性疾病之一,给养猪业造成重大经济损失,严重威胁人类健康,具有重要的公共卫生学意义。本实验从2011年10月~2013年3月对陕西省部分养猪场和生猪屠宰场感观健康猪群开展猪流感调查研究,目的是了解这一区域猪群中流感病毒的亚型分布、基因进化和隐形感染情况。为中国猪流感研究提供重要参考数据。实验获得以下成果:1.从感观健康猪群分离鉴定出6株H1N1猪流感病毒。2011年10月~2012年5月从陕西省部分养猪场和生猪屠宰场感观健康猪中随机采取猪鼻/气管拭子样本500份,常规处理后,经9~11日龄SPF鸡胚分离,采用RT-PCR对HA阳性鸡胚尿囊液进行H1N1猪流感病毒鉴定。本研究首次从陕西省感观健康猪群中分离到6株H1N1SIV,病毒分离率为1.2%。分别命名为A/Swine/Shaanxi/s1/2011(H1N1)、A/Swine/Shaanxi/s2/2012(H1N1)、A/Swine/Shaanxi/s3/2012(H1N1)、A/Swine/Shaanxi/s6/2012(H1N1)、A/Swine/Shannxi/sf/2011(H1N1)和A/Swine/Shaanxi/sw/2011(H1N1)。2.遗传进化分析表明6个H1N1猪流感病毒分离株属于avain-like H1N1猪流感病毒。对6个分离株全基因组的8个基因片段分别进行RT-PCR扩增、克隆和序列测定。获得6个H1N1猪流感病毒分离株全基因序列。应用DNAStar对分离株序列进行核苷酸和氨基酸比较与分析,通过MEGA4构建系统进化树,分析其遗传变异情况。结果表明6个分离株均为低致病性毒株,核苷酸相似性为98.3%~99.1%,且都位于avain-like H1N1猪流感病毒谱系,与我国江苏、辽宁、山东和香港等地avian-like H1N1猪流感病毒株同源性达97%~98%。其中A/Swine/Shaanxi/s2/2012(H1N1)同A/Swine/Shaanxi/s6/2012(H1N1)与从江苏省人群中分离的流感病毒亲源关系非常近,说明此病毒可以感染人群。6个分离株8个基因片段在抗原位点、蛋白受体结合位点或潜在糖基化位点等多处发生核苷酸变异,表明分离株的致病力、抗原特性和宿主适应性、药物抗性都发生了变化。3.血清学检测发现陕西省感观健康猪群中H1N1猪流感病毒隐形感染率达到31.6%。为了全面了解陕西省猪群中流感流行情况,于2011年10月~2013年3月采集陕西省7个区域12个养猪场和生猪屠宰场感观健康猪群猪血清样本1600份,用猪流感病毒分离株A/Swine/Shannxi/s1/2011(H1N1)制作检测抗原,HI试验测定血清中H1N1SIV特异性抗体,并对HI阳性样本进行NT试验验证。结果发现,陕西省感观健康猪群中H1N1猪流感抗体水平为16.7%~47.1%,平均达31.6%。HI表明猪流感感染有明显的季节性差异,主要发生在11月~3月冬春季节。对330份HI阳性血清以A/Swine/Shannxi/s1/2011(H1N1)分离株进行中和试验,结果显示93.3%的血清样本具有完全中和能力,表明陕西省猪群中存在H1N1流感病毒的隐性感染,且感染率较高。
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