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目的初步探讨脉冲场凝胶电泳(PFGE)在大理地区Mtb/HIV感染者Mtb基因分型中的应用;并通过建立大理地区Mtb/HIV感染者优势Mtb菌株巨噬细胞感染模型,探讨该菌株对巨噬细胞(Macrophages)凋亡的影响及相关分子机制,为阐明结核病(TB)的发病机制提供依据。方法收集大理地区27株Mtb/HIV感染者Mtb菌株,采用PFGE基因分型方法对其进行基因分型,并采用Quantity One和BioNumerics(6.6)软件对实验结果进行数字化处理和聚类分析。选取分型得到的Mtb优势菌株(S2),建立巨噬细胞感染模型,并设H37Ra感染组和空白组作为对照。在感染后的1 h、3 h、6 h、12 h及24 h,使用流式细胞技术(FCM)检测受感染巨噬细胞的凋亡率;同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)依次检测各组受感染巨噬细胞上清液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)分泌水平。结果1、27株Mtb/HIV感染者Mtb经PFGE后,每株可显示出16~18条DNA条带,各DNA片段大小在10 kb~240 kb之间不等,不同菌种的DNA条带位置有明显差异。2、27株Mtb/HIV感染者Mtb大理临床分离株被分为21个基因型,5个基因群,其中主要基因群是A群,并且标准株H37Rv也在A群。按≥80%计算成簇性27株Mtb/HIV感染者Mtb临床分离株全部成簇,共5簇。根据辛普森多样性指数计算D=0.698,各菌株间的相似度在72.9%~100%之间。3、与空白对照组比较,S2感染组巨噬细胞凋亡率明显增加(P<0.05);与H37Ra感染组比较,S2感染组在1 h、3 h及6 h巨噬细胞凋亡率低于H37Ra感染组(P<0.05);S2感染组和H37Ra感染组巨噬细胞凋亡率在1 h、3 h、6 h及12 h呈下降趋势(P<0.05),在24 h略有升高;空白对照组仅在1 h巨噬细胞凋亡率较高,3 h、6 h、12 h及24 h之间差异无统计学意义(P>0.05)。4、与空白对照组比较,S2感染组和H37Ra感染组TNF-α的表达量在6 h、12 h和24h明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);与H37Ra感染组比较,S2感染组TNF-α的表达量在6 h、12 h和24 h明显低于H37Ra感染组,差异有统计学意义(P<0.01);S2感染组、H37Ra感染组和空白对照组TNF-α表达均随时间的延长而升高,在12 h和24 h各组的差异均有统计学意义(P<0.01)。5、与空白对照组比较,S2感染组和H37Ra感染组在1 h、6 h、12 h和24 h IL-10表达量低于空白对照组,但仅在24 h差异有统计学意义(P<0.05),而在3h两组IL-10表达量却高于空白对照组,差异无统计学意义(P>0.05);S2感染组和H37Ra感染组之间IL-10表达量差异均无统计学意义(P>0.05),而在3 h两组IL-10表达量达到最大值,随着时间的延长,IL-10的表达水平逐渐降低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论1、PFGE分型法将27株Mtb/HIV感染者Mtb分为21个基因型,5个基因群,其中主要基因群是A群,并且标准株H37Rv也在A群,各菌株间的相似度在72.9%~100%之间。2、PFGE分型方法适用于大理地区Mtb/HIV感染者Mtb的基因分型研究,且具有良好的分辨能力。3、大理地区临床优势菌株S2感染巨噬细胞后,诱导巨噬细胞出现凋亡,凋亡率明显低于H37Ra感染组,高于空白对照。4、巨噬细胞凋亡的后期阶段都检测到不同水平TNF-α的增高,且Mtb感染巨噬细胞TNF-α的表达存在差异,大理地区S2感染组TNF-α表达低于H37Ra感染组;Mtb感染组别间IL-10的表达尚未发现差异。