第一部分　　 C57小鼠骨髓源性内皮祖细胞的分离、培养和鉴定　　 目的;探讨C57小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPCs)的分离、培养和鉴定方法。　　 材料与方法:取C57小鼠股骨骨髓,采用密度梯度离心法Histopaque1083分离出小鼠骨髓单个核细胞,在含有10％FBS、20ng/mlVEGF、1ng/mlbFOF的M199培养基中进行体外诱导、分化和扩增。培养7天后,去除未贴壁细胞,进行细胞鉴定,应用流式细胞仪检测Sca-1及Flk-1(VEGF-R2);荧光倒置显微镜观察EPCs吞噬DiI标记的乙酰低密度脂蛋白(DiI-AcLDL)和FITC标记的荆豆凝集素-1(FITC-UEA-1);血管形成实验鉴定内皮祖细胞血管形成能力。　　 结果:在内皮条件下培养的骨髓源性单个核细胞,24h后逐渐贴壁,并逐渐伸出伪足样突起,呈小杆状或梭形,培养第4天贴壁细胞开始增殖,呈“集落”样生长,外周梭形细胞较多,第7天梭形细胞显著增多,部分视野观察到梭形细胞首尾相连形成条索样结构;细胞培养7天后流式细胞仪检测细胞Flk-1及Sca-1双阳性率达60.06±4.96％;细胞摄取DiI-acLDL呈红色,摄取UEA-1呈绿色,双阳性细胞成黄色,阳性率达89.03±6.11％;血管形成实验显示EPCs在ECMatrixTM胶体上能形成管状血管结构。　　 结论:通过本研究分离、培养方法可从C57小鼠骨髓中获得较高纯度的EPCs,且具有内皮细胞的特征和功能。　　 第二部分评价SDF-1α/CXCR4在四氯化碳诱导的肝纤维化小鼠EPCs归巢中的作用　　 目的：检测四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化小鼠模型肝脏SDF-1α/CXCR4及骨髓来源内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells,EPCs)CXCR4受体的表达,评价SDF-1α/CXCR4轴在EPCs肝纤维化归巢中的作用。　　 方法:选用6周龄雌性纯系C57小鼠,采用40％的CCl4/橄榄油溶液腹腔注射,剂量为1ml/kg,每周2次,共4周,制成肝纤维化模型,取肝纤维化及正常对照组小鼠肝脏标本,采用RT-PCR及免疫组化检测SDF-1α的表达,采用RT-PCR及Western检测CXCR4受体的表达;分离、培养骨髓来源的EPCs,采用Transwell小室检测BM-EPCs对SDF-1α的迁移功能,流式细胞术检测BM-EPCsCXCR4的表达。　　 结果:与对照组相比,SDF-1α及CXCR4在肝纤维化模型小鼠肝脏组织中的表达较对照组明显上调,差异具有统计学意义(P＜0.05);BM-EFCsCXCR4的表达阳性率为(69.35％±16.04％),Transwell迁移实验显示,BM-EPCs向SDF-1α的迁移数量是158.40±12.66/高倍视野,明显高于正常组(87.80±14.24/高倍视野)((P＜0.01,t=8.29.),在体外经CXCR4受体抑制剂AMD3100处理后,BM-EPCs向SDF-1α迁移的数量显著减少(92.60±13.59/高倍视野)(P＜0.01)。　　 结论:SDF-1α/CXCR4轴在EPCs肝纤维化归巢中具有重要作用,为EPCs移植治疗肝纤维化提供了理论基础。　　 第三部分3.0-T磁共振R2*和R2mapping在SPIO标记内皮祖细胞向肝纤维化肝脏归巢的活体定量示踪研究　　 目的:评价临床用3.0T磁共振R2*和R2mapping定量示踪SPIO标记的内皮祖细胞(EPCs)向肝脏归巢。　　 方法:C57小鼠骨髓来源EPCs培养7d,并进行标记物鉴定,进行氧化铁颗粒-鱼精蛋白(FE-PRO)标记。用电镜和普鲁士蓝染色来评价铁颗粒摄取。制做不同浓度标记细胞(0-2.0×106/ml)的1.0％琼脂糖模型,并采用临床用3.0T磁共振进行R2和R2*测定;活体示踪:选用纯系C57小鼠(雌性,6周龄,体重19g-20g),腹腔内注射40％CCL4橄榄油溶液制成肝纤维化模型,经鼠尾静脉注射5.0×106个SPIO标记的EPCs悬液(0.5ml),在注射前及注射后2h、4d、8d及12d行磁共振扫描测定肝脏R2*和R2值,对照组小鼠接受同样剂量SPIO标记和未标记的EPCs移植,并行磁共振扫描,移植后12d所有小鼠均处死行组织病理学观察。　　 结果:电镜和普鲁士蓝染色显示SPIO铁颗粒标记率达95％以上,与正常细胞相比未见细胞器结构损伤;R2和R2*值与琼脂糖凝胶模型中标记细胞的数量成正比(r分别为0.98及0.99,P＜0.01),R2*效应较R2效应明显(P＜0.01):活体磁共振细胞示踪成像显示,肝纤维化及正常小鼠肝脏R2*值在注射SPIO标记的EPCs后2h、4d、8d均明显高于对照组(P均小于0.05),R2*值随时间延长逐渐减低;注射标记SPIO的细胞后肝纤维化小鼠肝脏R2*值在注射后2h、4d、8d均明显高于正常组(P均小于0.05);肝纤维化及正常小鼠肝脏R2值在注射SPIO标记的EPCs后2h及4d均明显高于对照组(P均小于0.05),R2值亦随时间延长逐渐减低;肝纤维化小鼠肝脏R2值在注射SPIO标记的EPCs后各时间段与正常组无明显差别(P均大于0.05);各组小鼠的R2*值均明显高于R2值,具有统计学差异(P＜0.05)。　　 结论:3.0TMRR2*和R2mapping能定量示踪移植细胞向肝脏归巢,R2*mapping优于R2mapping,为临床细胞移植治疗提供了一种无创、准确的示踪方法。