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目的: 利用杂交瘤技术制备脐血树突状细胞(DC)和食管癌细胞EC109融合疫苗EC109-DC,观察其在体内诱导抗肿瘤免疫反应。 方法: 1) 利用Ficoll-Hypaque密度梯度离心法分离脐静脉血单个核细胞,免疫磁珠法分离脐血CD34+干细胞。 2) 脐血CD34+干细胞体外用细胞因子GM-CSF(300ng/ml)、TNF-α(150u/ml)和SCF(200ng/ml)诱导分化培养,37℃、5%CO2饱湿条件下培养2周,隔日半保留换液并补加相应细胞因子,2周后收集成熟DC细胞。 3) 聚乙二醇法(polyethyleneglycol,PEG)将DC与食管癌细胞EC109按5∶1比例融合,HLA-DR MicroBeads标记,Mini MACS免疫磁式细胞分选器筛选阳性融合细胞EC109-DC。 4) 对数生长期EC109、成熟DC、融合疫苗EC109-DC,分别用FA-FITC、CD80-PE进行标记,应用流式细胞分析技术鉴定融合疫苗表型。 5) 融合疫苗通过SCID小鼠尾静脉及腹腔分别注射,进行体内致瘤性实验,观察小鼠是否诱生肿瘤,观察结束取小鼠脾、肝、肾等器官,石蜡切片,HE染色光镜观察。 6) 人外周血淋巴细胞(PBL)小鼠腹腔注射,重建SCID小鼠人免疫系统,定期尾静脉取血,离心得血清,以生物素-亲和素夹心ELISA法测定鼠血清中人IgG含量以判断重建结果。