浸润性乳腺癌是一种严重危害女性健康的疾病,我国女性乳腺癌发病率虽低于全球水平，但每年发病率增长迅速。据报告，每年全国有16.9万女性发病；位列我国女性恶性肿瘤第一位。我国女性每年因乳腺癌死亡人数约4.5万，位列我国女性恶性肿瘤死亡原因第六位。尽管近年来靶向治疗药物的应用提高了浸润性乳腺癌的五年生存率，然而，现有的靶向药物的应用受个体靶向基因表达情况制约，同时靶向药物耐药性出现率高，不利于个体化靶向药物治疗的开展。因此，扩大靶向药物的应用人群及降低现有的靶向药物耐药性成为乳腺癌靶向治疗研究的重点。DIAPH-3蛋白属于Formin蛋白家族,为肌动蛋白结合蛋白，构成细胞骨架蛋白，具有催化肌动蛋白单体成核及促进肌动蛋白丝延伸的作用。现有的研究证实，DIAPH-3基因的沉默使不稳定的微管蛋白生成，诱使细胞内吞作用障碍，使EGFR水平上调，激活其介导的下游信号传导通路。近年来研究表明，DIAPH-3沉默还可调控EGFR亚细胞定位和活性，进而影响个体对以EGFR为靶点的酪氨酸激酶抑制剂（TKI）的敏感性。目的：检测DIAPH-3与EGFR在浸润性乳腺癌组织及癌旁组织中的表达，研究DIAPH-3与EGFR的相关性，探讨其可能的作用机制，并进一步探讨其与浸润性乳腺癌临床病理特征及预后的关系。方法：1采用Western Blot及RT-PCR方法检测27例浸润性乳腺癌患者癌及癌旁组织中DIAPH-3与EGFR蛋白及mRNA的表达水平，探讨两者的相关性及其与浸润性乳腺癌临床病理特征的相关性。2收集河北医科大学第四医院2008年1月-2008年12月间手术切除原发性浸润性乳腺癌的石蜡包埋组织100例为研究对象，以同期手术切除的乳腺纤维腺瘤22例为对照，采用免疫组化SP法检测DIAPH-3及EGFR蛋白的表达情况,探讨其表达与浸润性乳腺癌临床病理特征的相关性；Kaplan-Meier生存曲线进行单因素生存分析；并采用COX回归模型进行多因素生存分析；探讨DIAPH-3及EGFR蛋白表达与浸润性乳腺癌预后的关系。结果：1Western Blot结果1.1DIAPH-3与EGFR蛋白在浸润性乳腺癌及癌旁组织中的表达DIAPH-3蛋白在癌组织中的表达量为0.233±0.086，低于癌旁组织的0.941±0.249，差异有统计学意义（P<0.05）。EGFR蛋白在癌组织中的表达量1.185±0.326高于癌旁组织的0.974±0.303，差异有统计学意义（P<0.05）。1.2DIAPH-3蛋白的表达与临床病理特征的关系DIAPH-3蛋白在无淋巴结转移组、1-3个淋巴结转移组、>3个淋巴结转移组表达量分别为0.293±0.071、0.214±0.068、0.194±0.067，差异有统计学意义（P<0.05），提示DIAPH-3蛋白的表达随着淋巴结转移个数的增加而减少。有脉管瘤栓组的表达量0.227±0.083，低于无脉管瘤栓组的表达为0.244±0.092，差异有统计学意义（P<0.05）。在有神经受侵组的表达量0.215±0.072，低于无神经受侵组的0.255±0.097，差异有统计学意义（P<0.05）。而DIAPH-3蛋白在浸润性乳腺癌不同临床分期、肿瘤最大直径、组织学分级组中的表达未见明显统计学意义（P>0.05）。1.3EGFR蛋白的表达与临床病理特征的关系EGFR蛋白在浸润性乳腺癌Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期不同临床分期组的表达量分别为1.182±0.307、1.183±0.402、1.293±0.329；差异具有统计学意义（P<0.05），结果提示临床分期越晚，EGFR蛋白表达量越高。在Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级不同组织学分级组中，EGFR蛋白表达量分别为1.190±0.345、1.266±0.274、1.286±0.227，差异有统计学意义（P<0.05）。结果提示，随着组织学分级的升高，EGFR蛋白表达逐渐升高。EGFR蛋白在无淋巴结转移组、1-3个淋巴结转移组、>3个淋巴结转移组表达量分别为0.975±0.263、1.002±0.256、1.534±0.133，差异有统计学意义（P<0.05），即EGFR蛋白的表达随着淋巴结转移个数的增加而逐渐升高。EGFR蛋白的表达与肿瘤最大直径、是否有脉管瘤栓、神经是否受侵无关，差异无统计学意义（P>0.05）。2RT-PCR结果2.1DIAPH-3与EGFR mRNA在浸润性乳腺癌及癌旁组织中的表达DIAPH-3mRNA在癌组织中的表达量为0.596±0.094，低于癌旁组织中的1.034±0.096，差异有统计学意义（P<0.05）。EGFR mRNA在癌组织中的表达量1.098±0.010高于癌旁组织中的1.043±0.097，差异有统计学意义（P<0.05）。2.2DIAPH-3mRNA的表达与临床病理特征的关系DIAPH-3mRNA在无淋巴结转移组、1-3个淋巴结转移组、>3个淋巴结转移组表达量分别为0.646±0.082、0.593±0.090、0.523±0.077；在肿瘤最大直径d≤2cm组、2<d≤5cm组、d>5cm组的表达量分别为0.702±0.096、0.594±0.078、0.568±0.093，差异均有统计学意义（P<0.05），结果提示DIAPH-3mRNA的表达随着淋巴结转移个数的增多而逐渐降低；肿瘤最大直径越大其表达量越低。DIAPH-3mRNA在有脉管瘤栓组的表达量为0.557±0.090，低于无脉管瘤栓组的0.616±0.088；在有神经受侵组的表达量为0.543±0.074，低于无神经受侵组的0.638±0.083，，差异均有统计学意义（P<0.05）。 DIAPH-3mRNA的表达与浸润性乳腺癌临床分期、组织学分级无关，差异无统计学意义（P>0.05）。2.3EGFR mRNA的表达与临床病理特征的关系EGFR mRNA在不同临床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期的表达量分别为0.979±0.047、1.098±0.090、1.145±0.078；在不同组织学分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级的表达量分别为1.022±0.100、1.094±0.087、1.174±0.085；在无淋巴结转移组、1-3个淋巴结转移组、>3个淋巴结转移组表达量分别为1.023±0.053、1.111±0.101、1.182±0.072，差异均有统计学意义（P<0.05），结果提示临床分期越晚、组织学分级越高、淋巴结转移个数越多，EGFRmRNA的表达水平也越高。而EGFR mRNA的表达水平与肿瘤最大直径、是否有脉管瘤栓、神经是否受侵无关，差异无统计学意义（P>0.05）。3免疫组化结果3.1DIAPH-3与EGFR蛋白在浸润性乳腺癌组织及乳腺纤维腺瘤组织中的表达DIAPH-3蛋白在浸润性乳腺癌组织中表达阳性率低于乳腺纤维腺瘤组织中的表达阳性率(36%，66.7%)，差异有统计学意义(P<0.05)，EGFR蛋白在浸润性乳腺癌组织中的表达阳性率高于乳腺纤维腺瘤组织中的表达阳性率(62.0%，36.3%)，差异有统计学意义（P<0.05）。DIAPH-3、EGFR蛋白在浸润性乳腺癌中的表达呈负相关，差异有统计学意义（r=-0.271，P<0.05）。3.2DIAPH-3蛋白的表达与临床病理特征的相关性DIAPH-3蛋白在无淋巴结转移组、1-3个淋巴结转移组、>3个淋巴结转移组阳性率为50%、29%、21%，差异有统计学意义（P<0.05），即DIAPH-3蛋白表达水平随淋巴结转移个数的增加而减少。DIAPH-3蛋白在有脉管瘤栓组的表达低于无脉管瘤栓组（23.5%，49.0%）,差异有统计学意义（P<0.05）。DIAPH-3蛋白在有神经受侵组的表达低于无神经受侵组（19.4%，45.3%），差异有统计学意义（P<0.05）。DIAPH-3蛋白表达与年龄、组织学分级、临床分期、肿瘤最大直径无关，差异无统计学意义（P>0.05）。3.3EGFR蛋白的表达与临床病理特征的相关性EGFR蛋白在无淋巴结转移组、1-3个淋巴结转移组、>3个淋巴结转移组阳性率分别为42%、75.8%、90.5%；在不同组织学分级Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级的阳性率分别为33.3%、58.0%、75.0%；在不同的临床分期Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期组中，EGFR蛋白阳性率分别为37.5%、66.7%、83.3%,差异均具有统计学意义（P<0.05）。结果提示EGFR蛋白表达随着淋巴结转移个数的增多逐渐增加；随着组织学分级的升高而增加；随着临床分期升高逐渐增加。EGFR蛋白在有脉管瘤栓组的表达高于无脉管瘤栓组（80.4%，42.9%）；EGFR蛋白在有神经受侵组的表达高于无神经受侵组（80.6%，51.6%），差异均有统计学意义（P<0.05）。EGFR与浸润性乳腺癌患者的年龄、肿瘤最大直径无关，差异无统计学意义（P>0.05）。3.4DIAPH-3蛋白表达与ER、PR、HER-2之间的关系浸润性乳腺癌患者中，DIAPH-3蛋白表达阳性率在ER阳性组高于ER阴性组（44.8%，22.2%），差异有统计学意义（P<0.05）。DIAPH-3蛋白表达阳性率在HER-2扩增组高于HER-2无扩增组（50.0%，28.8%），差异有统计学意义（P<0.05）。DIAPH-3蛋白表达阳性率在PR阳性组与PR阴性组之间无明显差异，差异无统计学意义（P>0.05）。3.5EGFR蛋白的表达与ER、PR、HER-2之间的关系EGFR蛋白表达阳性率在ER阳性组低于ER阴性组（52.2%，83.3%）；在PR阳性组显著低于PR阴性组（47.5%，84.6%）；在HER-2扩增组低于HER-2无扩增组(32.4%，77.3%)；差异均有统计学意义（P<0.05）。3.6DIAPH-3蛋白与EGFR蛋白的表达与浸润性乳腺癌患者预后的关系Kaplan-Meier单因素生存分析显示，在浸润性乳腺癌患者中，DIAPH-3蛋白阳性组的五年生存率高于DIAPH-3阴性组五年生存率（94.4%，79.7%），EGFR蛋白阳性组的五年生存率低于EGFR蛋白阴性组五年生存率（79.0%，94.7%），差异均有统计学意义（P<0.05）。在COX多因素生存分析中，DIAPH-3表达减少与淋巴结转移个数均与预后有相关性（P<0.05），可以作为判断浸润性乳腺癌患者预后的独立因素。结论：1DIAPH-3在浸润性乳腺癌组织中表达降低与肿瘤浸润及转移相关可能是潜在的抑癌基因。2EGFR在浸润性乳腺癌组织中表达升高与肿瘤临床恶性进展及预后不良有关，通过DIAPH-3与EGFR的相关性研究，有利于靶向抑制EGFR表达升高，提高患者的生存率。3DIAPH-3表达水平的降低与浸润性乳腺癌预后不良有关。DIAPH-3为影响浸润性乳腺癌预后的独立因素，提高浸润性乳腺癌患者组织内的DIAPH-3的表达水平可能有利于提高患者的生存率。