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目的本研究拟探讨应用免疫组化检测宫颈癌组织中的HPV16-E6的表达在宫颈癌的早期诊断中的临床应用价值；进一步应用RNA干扰技术为手段，以HPV编码的癌蛋白E6为靶标，探讨靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌细胞的生物学行为的影响，从而为HPV16-E6这一重要的致瘤蛋白的功能研究开辟了一个新的途径，为HPV16-E6阳性肿瘤的靶向基因治疗提供了新的理论和实验依据；为临床HPV感染及宫颈癌治疗探索新方法。方法收集宫颈癌组织病理切片应用免疫组化检测宫颈癌组织中的HPV16-E6的表达；构建靶向HPV16-E6的siRNA表达载体，应用体外转染试剂转染HPV16-E6阳性的宫颈癌CaSki细胞，分别应用western blotting和RT-PCR检测CaSki细胞中E6蛋白质和mRNA的表达；应用MTT分析检测细胞的增殖活性，应用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。进一步应用western blotting、细胞色素c检测以及caspase活性分析等检测细胞凋亡相关分子的表达和活性，研究靶向HPV16-E6的siRNA诱导细胞凋亡的分子机制。进一步建立宫颈癌裸鼠移植瘤模型，应用靶向HPV16-E6的siRNA进行瘤体内多点注射，观察靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌裸鼠移植瘤的影响。结果宫颈癌组织病理切片免疫组化检测结果显示：在慢性炎症HPV16-E6阳性率为8％，CINs中HPV16-E6阳性率为22.7％，宫颈癌组织中HPV16-E6阳性率为55.9％。在宫颈癌中，Ⅰ期HPV16-E6阳性率为44.4％，Ⅱ期HPV16-E6阳性率为55.6％，Ⅲ期HPV16-E6阳性率为80％。western blotting和RT-PCR检测结果显示瞬时转染靶向HPV16-E6的siRNA表达载体后，CaSki细胞中E6蛋白质和mRNA的表达下调；MTT分析结果表明瞬时转染靶向HPV16-E6的siRNA表达载体后，细胞的增殖活性被抑制；流式细胞术检测结果表明，瞬时转染靶向HPV16-E6的siRNA表达载体后，细胞周期被阻滞于G1／S期，同时细胞凋亡增加；进一步应用western blotting检测抑凋亡蛋白Bc1-2的表达显示，瞬时转染靶向HPV16-E6的siRNA表达载体后，Bc1-2的表达下调；细胞色素c释放实验结果显示，瞬时转染靶向HPV16-E6的siRNA表达载体后，细胞色素c自线粒体中释放到细胞浆中，从而诱导细胞凋亡；Caspase活性分析结果亦表明，瞬时转染靶向HPV16-E6的siRNA表达载体后，细胞内Caspase3、Caspase8、Caspase9均被激活。在体内实验亦表明，靶向HPV16-E6的siRNA能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长，诱导肿瘤细胞凋亡。结论HPV16-E6的表达与宫颈癌的发生发展密切相关，随着病情恶化，HPV16-E6的阳性率逐渐增加。应用免疫组化检测宫颈癌组织中的HPV16-E6的表达有助于宫颈癌的早期诊断。在宫颈癌细胞CaSki中，靶向HPV16-E6的siRNA能够有效抑制细胞增殖，诱导细胞周期阻滞于G0／G1期，并诱导细胞凋亡。靶向HPV16-E6的siRNA诱导细胞凋亡的可能机制为：靶向HPV16-E6的siRNA抑制HPV16-E6的表达后，使凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达下调；并改变线粒体膜的通透性，诱导细胞色素C的释放，介导细胞凋亡。并进一步证明抑制HPV16-E6可活化Caspase-3，-8和-9，并且Caspase-3和-9活性升高比Caspase-8更明显。表明在宫颈癌细胞CaSki中，靶向HPV16-E6的siRNA不仅能够介导细胞凋亡的线粒体通路的活化，而且能够活化细胞凋亡的死亡受体通路，但以线粒体通路的活化为主。在宫颈癌裸鼠移植瘤模型中，靶向HPV16-E6的siRNA能够显著抑制裸鼠移植瘤的生长，诱导肿瘤细胞凋亡。因此，我们认为HPV编码的癌蛋白E6可能为靶向基因治疗的潜在关键分子靶标；靶向HPV16-E6的siRNA能够抑制宫颈癌细胞增殖诱导细胞凋亡，从而为HPV16-E6这一重要的致瘤蛋白的功能研究开辟了一个新的途径，为HPV16-E6阳性肿瘤的靶向基因治疗提供了新的实验依据；为临床HPV感染及宫颈癌治疗探索新方法。