灰飞虱Laodelphax striatellus（Fallén）是危害水稻、玉米、小麦等重要作物的主要害虫,既可直接危害,也可传播多种病毒病害,严重危害我国的粮食生产。目前,田间主要防治方式为化学防治,但常年的不合理用药方式,导致其对多种类型的杀虫剂产生了抗性。三氟苯嘧啶属于介离子类杀虫剂,对灰飞虱具有很好的杀虫活性,在灰飞虱的田间防治及抗性治理方面具有重要价值。实验室前期已经获得了灰飞虱抗三氟苯嘧啶品系（RR=26.29倍）,本试验在前期研究的基础上,继续使用三氟苯嘧啶对此品系进行抗性选育,比较敏感和抗性品系体内的三种解毒代谢酶活性、解毒代谢基因的相对表达量。利用RNA干扰技术,进一步探究过量表达代谢基因在抗性中的作用,初步探讨了灰飞虱对三氟苯嘧啶产生抗性的代谢机制。为了获得更高水平的抗性品系,在室内采用稻苗喷雾法,继续对灰飞虱抗性品系(RS21)进行连续10代的抗性选育,获得RS31抗性品系。结果表明,LC50值从14.45 mg·L-1(RS21)上升到26.22 mg·L-1(RS31),抗性倍数从26.29倍增长到47.67倍,抗性发展处于快速上升阶段。为了明确解毒酶与灰飞虱对三氟苯嘧啶的代谢抗性的相关性,我们比较了抗性和敏感品系三种解毒酶活性的差异。酶活测定结果表明,抗性品系RS31细胞色素P450单加氧酶（P450s）和羧酸酯酶（Car E）的活性分别是敏感品系的1.85倍和1.30倍,显著高于敏感品系;谷胱甘肽S-转移酶（GST）的活性在两个品系之间无显著差异。采用RT-qPCR分别测定比较了RS31抗性品系和敏感品系的46个P450基因、15个羧酸酯酶基因、16个谷胱甘肽S-转移酶基因和7个ABC转运蛋白基因的表达水平差异,结果表明,46个P450基因中,有24个基因差异表达明显,其中CYP303A1、CYP4CE2、和CYP419A1v2基因上调倍数较高,分别为7.6倍、4.4倍和15.8倍。所筛选的15个Car E基因中,有9个基因差异表达明显,其中,Ls Car E6和Ls Car E12基因上调倍数较高,分别为8.3倍和16.8倍。所筛选的16个GST基因和7个ABC转运蛋白基因中,分别有10个基因和2个基因差异表达明显,但未找到高倍上调的基因。分别选择表达水平较高的2个P450基因和2个Car E基因,采用人工饲料饲喂法,利用RNAi技术对其进行基因沉默,检测其在抗三氟苯嘧啶中的作用。沉默效率研究结果表明,饲喂含有50 ng/μL的ds RNA的人工饲料5天即可对4个代谢基因起到较好的沉默效果,CYP303A1、CYP419A1v2、Ls Car E6和Ls Car E12的基因沉默效率分别为83.2%、54.7%、62.5%、72.5%。采用稻苗浸渍法,分别测定了三氟苯嘧啶（20 mg/L）对沉默单基因和共沉默2个P450基因和2个Car E基因后抗性品系灰飞虱的活性。结果表明,单基因沉默灰飞虱的死亡率分别为51.00%、61.33%、56.67%和57.00%,显著高于对照组（26.67%）。共沉默P450基因和Car E基因灰飞虱死亡率分别为90.00%和85.00%,均显著高于单基因沉默。研究结果表明灰飞虱体内P450基因CYP303A1和CYP419A1v2,羧酸酯酶基因Ls Car E6和Ls Car E12表达水平升高能导致其对三氟苯嘧啶产生抗性,且多个基因能协同作用,增加抗性水平。