论文部分内容阅读
目的:建立一种胃酸与内毒素的协同作用的实验性吸入性肺炎模型并探究吸入性肺炎与细胞焦亡的关系。方法:雄性清洁级SD大鼠74只,体重约为200-240g,10只大鼠用于提取大鼠胃内容物,通过过滤、高压灭菌、离心、盐酸调节PH值等方法制备酸性胃内容物(Combined acid and small particles,CASP),将剩余64只SD雄性大鼠随机分配到4个组,分别为对照组(NS/NS组),酸性胃内容物/盐水组(CASP/NS组),盐水/LPS组(NS/LPS组),酸性胃内容物/LPS组(CASP/LPS组)。所有动物在第一次滴注后(即在滴注酸性胃内容物悬液或生理盐水)6h或24h后麻醉放血处死。取肺组织行HE染色,光镜下观察肺组织病理改变并评估肺损伤;检测肺组织MPO;酶联免疫法检测IL-1β表达,Western blot检测GSDMD,NLRP3表达;免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)检测GSDMD表达。检测湿干比,并通过支气管肺泡灌洗,检测BALF中总蛋白浓度、BALF中有核细胞计数。结果:1.HE染色病理:NS/NS组大鼠肺组织保持基本肺泡完整结构。NS/LPS组、CASP/NS组、CASP/LPS组可见肺损伤,CASP/LPS组肺组织病理损伤最为明显,肺泡完整结构破坏,肺泡壁断裂,肺泡间隔增厚。2.肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性(U/g):造模6h、24h后,CASP/LPS组MPO高于CASP/NS组、NS/LPS组和对照组(P均<0.05);CASP/NS组高于对照组(均P<0.05)。3.肺组织匀浆中IL-1β水平:造模6h后,CASP/LPS组、CASP/NS组、NS/LPS组肺组织匀浆IL-1β明显高于对照组(P均<0.05);CASP/LPS组明显高于CASP/NS组和NS/LPS组(P均<0.05)。造模24h后,CASP/LPS组、CASP/NS组和NS/LPS组肺组织匀浆IL-1β明显高于对照组(均P<0.05);CASP/LPS组明显高于CASP/NS组(P<0.05)。4.NLRP3、GSDMD蛋白的表达:Western blot结果显示造模6、24h后,CASP/LPS组、CASP/NS组和NS/LPS组GSDMD表达均明显高于对照组(P均<0.05)。造模6h,CASP/LPS组NLRP3表达明显高于对照组(均P<0.05);造模24h,CASP/LPS组NLRP3表达明显高于对照组、CASP/NS组和NS/LPS组(P均<0.05)。免疫组化结果显示:半定量显示NS/NS组肺组织有弱的GSDMD表达,CASP/NS,CASP/LPS组有较强GSDMD物质表达,以CASP/LPS最强。5.肺湿/干(W/D)比值:6h时,CASP/LPS组、CASP/NS组、NS/LPS组W/D明显高于对照组(P均<0.05);CASP/LPS组W/D明显高于CASP/NS组和NS/LPS组(P均<0.05)。造模24h后,CASP/LPS组W/D高于CASP/NS组、NS/LPS组和对照组(均P<0.05)。6.BALF总蛋白:造模6h、24h后,CASP/LPS组、CASP/NS组、LPS/NS组BALF总蛋白高于对照组(P均<0.05);CASP/LPS组BALF总蛋白明显高于NS/LPS组、CASP/NS组(P均<0.05)。7.BALF有核细胞总数:造模6h、24h后,CASP/LPS组、CASP/NS组、NS/LPS组有核细胞总数明显高于对照组;CASP/LPS组有核细胞总数明显高于CASP/NS组和NS/LPS组(P均<0.05)。结论:通过CASP联合LPS滴注建立大鼠吸入性肺炎动物模型,可诱导大鼠发生吸入性肺损伤,损伤程度较单独滴注酸性胃内容物或LPS更重。酸性胃内容物联合LPS吸入引起GSDMD、NLRP3和IL-1β表达上调提示其可能通过激活NLRP3炎症小体信号通路,引起细胞焦亡,造成肺损伤。