胃癌微环境中TGF-β1通过调节TAM中mir-155的表达影响其表型

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目的:研究胃癌微环境中TGF-β1对肿瘤相关巨噬细胞中miR-155的表达的影响,以及miR-155的表达变化对TAM表型的影响,以探寻胃癌肿瘤相关巨噬细胞表型改变的可能机制。  方法:  1、为了观察胃癌组织中TGF-β1的表达与M2型巨噬细胞的浸润是否具有相关性,用免疫组织化学的方法检测人胃癌组织和正常胃组织中TGF-β1和M2型巨噬细胞表面分子CD163的表达情况。  2、为了明确胃癌肿瘤相关巨噬细胞内miR-155的表达变化及导致该变化的可能机制,进行如下实验:首先,佛波酯诱导人单核细胞株(THP-1),使其分化为巨噬细胞,用胃癌肿瘤培养上清刺激巨噬细胞为胃癌肿瘤相关巨噬细胞。然后,用荧光定量PCR方法检测巨噬细胞内miR-155的表达,并比较巨噬细胞、胃癌肿瘤相关巨噬细胞以及用TGF-β1刺激的巨噬细胞中miR-155表达差异;最后,用TGF-β1受体阻断剂刺激胃癌肿瘤相关巨噬细胞,荧光定量PCR方法检测巨噬细胞内miR-155的表达。  3、观察miR-155对巨噬细胞表型的影响:构建miR-155真核表达质粒,转染巨噬细胞,ELISA方法检测转染后两组细胞上清内IL-10和IL-12的含量。  结果:  1、免疫组化结果表明,CD163作为巨噬细胞的表面分子标记,主要表达在巨噬细胞的胞膜,而TGF-β1作为一种生长因子,主要表达在肿瘤细胞的胞质,同时胃癌组织中TGF-β1、CD163的表达都较癌旁正常组织高,统计学分析显示CD163和TGF-β1的表达呈正相关。  2、胃癌肿瘤上清刺激的巨噬细胞内miR-155的表达较非肿瘤上清刺激巨噬细胞内miR-155的表达降低,TGF-β1刺激的巨噬细胞中miR-155表达亦显著降低;使用TGF-β1受体阻断剂刺激后,胃癌肿瘤相关巨噬细胞内miR-155的表达显著升高。  3、巨噬细胞转染miR-155后,ELISA检测其分泌的IL-10的水平较转染空载质粒的巨噬细胞组低,而细胞上清中分泌的IL-12的水平较转染空载质粒的巨噬细胞组高。  结论:miR-155具有诱导巨噬细胞向M1型分化的潜能,而胃癌细胞分泌的TGF-β1能下调巨噬细胞中miR-155的表达,这提示胃癌细胞分泌的TGF-β1能够通过下调巨噬细胞中miR-155的表达而促进巨噬细胞向M2型分化。  
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