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目的:脂质体介导质粒hHCN2/pcDNA3转染哺乳动物细胞,包括人胚肾细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK293)和乳鼠心肌细胞,研究在HEK293细胞稳定表达后的hHCN2通道电流(IhHCN2)特点,并研究胺碘酮对IhHCN2的急性作用;研究乳鼠心肌细胞起搏电流(If)及其基因表达情况,观察起搏电流阻断剂ZD7288和Cs+对乳鼠心肌细胞自发性搏动的影响,以及质粒hHCN2/pcDNA3瞬时转染乳鼠心肌细胞后对其自发性搏动的影响,探讨If在乳鼠心肌细胞自发性搏动的作用,为缓慢心律失常的生物起搏基因治疗提供依据。方法:质粒hHCN2/pcDNA3转化大肠杆菌JM109,以中量质粒抽提试剂盒提取、纯化。采用脂质体介导hHCN2/pcDNA3转染HEK293细胞,加入G418进行稳定筛选,获得稳定的G418抗性的HEK293细胞系,全细胞膜片钳技术记录IhHCN2的电生理特点以及胺碘酮对IhHCN2的急性作用,RT-PCR及western blot检测hHCN2通道的mRNA和蛋白表达情况。分离、培养乳鼠心肌细胞,脂质体介导质粒hHCN2/pcDNA3转染乳鼠心肌细胞,利用膜片钳技术、Real time PCR及Western blot检测转染前后乳鼠心肌细胞的起搏电流及其HCN mRNA表达,观察起搏电流阻断剂ZD7288和Cs+以及起搏通道基因hHCN2转染乳鼠心肌细胞对乳鼠心肌细胞自发性搏动的影响。结果:1.脂质体转染法将hHCN2基因导入HEK293细胞,瞬时转染和稳定筛选的HEK293细胞用膜片钳技术记录到超极化内向电流IhHCN2,-80mV～-90mV开始激活,激活缓慢,没有明显失活过程,呈电压、时间依赖性激活。RT-PCR和Western blot明显检测到稳定转染的HEK293细胞有hHCN2 mRNA和蛋白表达。2.细胞外液K+浓度为30mM时,I hHCN2的反转电位17±3mV(n=10), PNa/PK为0.24;降低外液Na+浓度和K+浓度,IhHCN2电流密度减小;测试电位-140mV时,0.5μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L ZD7288降低IhHCN2峰值电