猪囊尾蚴特异性Ts16低分子量蛋白筛选、基因克隆及表达

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研究目的:筛选、鉴定猪囊尾蚴囊液低分子量高敏感性和高特异性抗原组分,为囊尾蚴病免疫学诊断研究提供新的候选抗原分子。   实验材料与方法:从自然感染的家猪肌肉组织分离收集猪囊尾蚴,抽取囊液制备粗抗原,用十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其总蛋白组分;用制备的囊液抗原免疫家兔制备抗血清,用ELISA筛选从临床获得的脑囊尾蚴病患者高效价抗血清;分别用两种抗血清,以蛋白质印迹(WesternBlot)筛选、鉴定囊尾蚴囊液内低分子量蛋白组分;将获得的特异性蛋白条带分别转至PVDF膜上,测定两者的N-末端氨基酸序列。   将用兔抗血清鉴定的蛋白组分的氨基酸序列翻译成DNA序列,进行Blast数据库搜索,以primer5.0软件分析设计简并引物,用PCR从猪囊尾蚴cDNA文库扩增目的基因,将目的基因克隆入原核表达载体进行表达。   研究结果:分别用兔抗血清和脑囊虫病患者抗血清从囊尾蚴囊液中各筛选、鉴定出-Mr16000的特异性蛋白组分,二者N-末端起始的10个氨基酸序列各为DLSKGEWQLV和GPSDNEWQGV;从猪囊尾蚴cDNA文库中扩增出前者的Ts16基因,原核表达后获得了重组蛋白TsR16,其分子量为Mr10800。   结论:用兔抗血清筛选、鉴定的猪囊尾蚴特异性Mr16000抗原组分,后经克隆和表达的TsR16(分子量为Mr10800)为猪囊尾蚴病免疫学诊断的进一步研究提供了有价值的实验资料;测定的用脑囊虫患者抗血清筛选的Mr16000的N-末端氨基酸序列,具有进一步研究价值。
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