一、研究背景与目的 肺癌与其它实体瘤一样，其发生、发展和转移均依赖于血管生成。以新生血管为靶点，抑制肿瘤血管生成、阻断肿瘤的营养来源和迁移通道，这已成为近年来癌症治疗的新策略。本研究拟建立一种模拟体内环境的肺微血管内皮细胞(LMVEC)生长的三维培养系统，观察抗血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体Avastin对肺癌诱导的肺微血管生成的影响效应，并探讨其作用机制。研究反应停、Avastin对A549细胞裸鼠皮下肿瘤血管生成的影响。 二、材料和方法 (一) 材料 低糖型DMEM干粉和胎牛血清(FBS)均购自Hyclone，6孔细胞培养板为Costar产品；胰岛素、转铁蛋白、EGF、地塞米松、内皮细胞生长添加物(ECGS)、PEG 20000、碘丙啶(PI)、RNA酶(Rnase)、TNP-470、结晶紫和多聚甲醛均为SIGMA公司产品；鼠抗人CD31单克隆抗体、鼠IgG和TRITC标记兔抗鼠二抗均购自北京中杉金桥公司。滤膜和MW10000透析膜为Millipore产品。二氧化碳培养箱、Nikon倒置相差显微镜及相机、eppendorf5810R型离心机、LXY—Ⅱ型离心机、微量加样器、荧光显微镜、电子分析天平、超净工作台、眼科剪刀、镊子。 (二)试验方法 1．肺组织的取材、处理和内皮细胞的培养及其鉴定。 2．显微镜下观察培养过程中LMVEC的形态学变化并拍照。