紫花苜蓿（Medicago sativa L.）具有适应性强、蛋白含量高、适口性好和营养价值高等特点,是全球栽培面积最大的优良牧草。由于我国草产业发展相对滞后,紫花苜蓿产量和种子严重不足,尽管进口量逐年增加,仍难满足市场需求。此外紫花苜蓿抗旱耐盐能力较弱,在干旱和盐渍化环境下难以生长,加之虫害的威胁,这严重制约了紫花栽培面积的扩大和产量的进一步提高。因此,利用分子育种手段培育兼具抗旱、耐盐和抗虫性状的紫花苜蓿新品种（系）,对促进我国草牧业发展具有重要意义。本研究主要分为两大部分:一是构建抗虫基因Bt的植物表达载体pCAMBIA3301-Bt cry1ac,分别转化拟南芥和紫花苜蓿;二是将共表达PeDREB2a和KcERF基因的中苜一号紫花苜蓿株系（Z6和Z7）和野生型（WT）植株定植到大田,进行株高、分枝数等表型分析,同时进行乙烯、吲哚乙酸和纤维素含量的测定和转录组测序分析。取得的主要研究结果如下:1.优化了中苜一号和甘农四号两个紫花苜蓿品种遗传转化体系:确定叶片为最佳外植体;MS培养基+0.2 mg/L 6-BA+4 mg/L 2,4-D为愈伤组织诱导的最佳培养基;2 mg/L为草铵膦（PPT）的最适筛选浓度;1/2MS为分化培养基;1/2MS+0.05 mg/L IBA为生根培养基。2.成功构建了以抗草胺膦除草剂Bar基因作为筛选标记基因的pCAMBIA3301-Bt cry1ac植物表达载体,转化拟南芥得到纯合株系,证明所构建载体具有活性,可用于后续紫花苜蓿的遗传转化。将已构建好的pCAMBIA3301-Bt cry1ac载体转化上述两个紫花苜蓿品种,目前已获得中苜一号抗性苗17株、甘农四号21株。3.利用Taqman PCR对共表达PeDREB2a和KcERF基因紫花苜蓿植株进行目的基因的拷贝数检测,结果表明PeDREB2a、KcERF和CP4-EPSPS基因在株系Z6、Z7、Z9均为单拷贝。4.Z6和Z7转基因植株株高、分枝数、叶片吲哚乙酸含量、纤维素含量均显著高于野生型,而叶片乙烯含量显著低于野生型。5.通过叶片转录组测序分析,从转基因株系Z6和Z7筛选得到4个受PeDREB2a转录因子调控的基因:Cluster-20515.123705₁、Cluster-20515.55191₁、Cluster-20515.55194₁和Cluster-20515.55195₁,且qRT-PCR验证结果与转录组数据一致。