复方解酒护肝分散片,由葛根、枳椇子、黄芪三味中药材组成,用于解酒护肝的中药组方。方中主要有效成分为异黄酮类化合物,为达到高效、速效的目的,我们将有效成分进行提取精制,异黄酮类化合物为难溶性物质,其溶解度低、溶出速率小、生物利用度差,我们利用包合技术将这类物质进行包合制成包合物,以增加其溶解度、增大溶出速率、使药物迅速吸收提高药物的生物利用度。中药分散片适用于难溶性药物,具有服用方便,崩解快、崩解后颗粒细小有利于药物的溶出,加速药物的吸收,提高药物的生物利用度,另外,将中药制成分散片后,给药比较方便,可吞服、含化以及冲水后服用,其生产工艺简单、成本低廉,有利于工业化生产。本研究围绕三种中药,从主要成分提取、纯化工艺、包合技术、分散片制备以及成品药效等方面进行研究,开发出一种速效、高效、质量安全可控、服用方便的分散片,为其综合开发利用提供科学依据。1.建立葛根素、芦丁体外分析检测方法为保证制剂质量,建立全面、完善、系统的分析方法是十分必要的。分别建立葛根素、芦丁的高效液相、紫外分光光度法含量测定方法,并进行方法学验证,结果表明建立的复方解酒护肝分散片HPLC、UV分析方法适应性、方法专属性、精密度、回收率均符合要求。为处方优化、稳定性考察提供了灵敏、准确的分析方法。2.有效成分提取纯化工艺研究葛根解酒护肝作用的有效成分为异黄酮类物质,其中起主要作用的为葛根素,且在提取过程中多以葛根素作为含量测定的指标。据文献报道葛根异黄酮提取方法多为传统提取工艺之间的比较,并采用传统的正交设计进行工艺优化,优化结果葛根素提取率为:39.40 mg·g-1。本研究采用乙醇回流法、超声波法、SFE-CO2流体萃取法、闪式提取法等方法提取葛根异黄酮,以葛根素的含量作为指标,对4种提取方法进行比较,并对其中一种最优方法进行工艺优化。闪式提取法效果最好,通过响应面法获得最优工艺条件为:乙醇浓度:58%,料液比:1:30,闪提时间:2 min,在此条件下,葛根素的提取率为:50.72 mg·g-1。优化的工艺稳定可行、重复性好、效率高,且此法测定其含量灵敏度高、结果准确,为野葛的开发利用提供科学依据。本研究采用超声波法提取枳椇子总黄酮,以单因素和正交试验为基础,优化的参数为:乙醇浓度:70%乙醇溶液,液料比:14 ml/g,超声功率:160 W,超声温度:70℃,超声时间:1 h,含量为1.17 mg·g-1。采用AB-8型大孔树脂对葛根异黄酮进行纯化,乙醇分数:50%,用量:500 ml,流速:6 ml/min,葛根素纯度达到60%。3.β-环糊精包合物的研究为了制备葛根异黄酮-β-环糊精包合物,本论文采用研磨法、磁力搅拌法、超声波法、乳匀机法及搅拌桨法制备包合物,以包封率、溶出度为指标,对5种方法进行比较,并对其中一种最优方法进行工艺优化。优化结果,搅拌桨法效果最佳,通过响应面法获得最佳工艺参数为:摩尔比:1:1.19,包合温度:50℃,包合时间:30 min,包封率:93.68%,溶出度:95.33%。各项参数与模型均能较好地吻合,优选出的最佳工艺稳定可行。采用IR法、DSC法对包合物进行分析。表明葛根素已被包合到β-环糊精的空腔中;药物制成包合物后,主、客分子、包合物的结构、理化性质有所变化,表现在水中溶解性能的显著提高,有利于生物利用度的提升,为开发葛根新的口服剂型提供理论依据。本研究对包合物稳定性进行研究。影响因素试验表明,葛根异黄酮-β-环糊精包合物在低温、低湿环境下稳定,在高温、高湿环境下样品性状、含量会有所变化。故应置低温、干燥条件下保存。本研究以枳椇子异黄酮为原料药,采用搅拌桨法,按照主、客分子摩尔比为(1:1),包合温度为60℃,包合时间为30 min,制备成枳椇子异黄酮-β-环糊精包合物。4.粉体性质的研究通过粉体性质的研究,葛根异黄酮提取物、葛根异黄酮-β-环糊精包合物、枳椇子异黄酮提取物、枳椇子异黄酮-β-环糊精包合物、黄芪多糖的休止角>40°,其流动性较差;而复方解酒护肝分散片颗粒的休止角<40°,原料药制成颗粒时其流动性得到了改善。葛根异黄酮提取物、枳椇子异黄酮提取物、枳椇子异黄酮-β-环糊精包合物、黄芪多糖的压缩度>20%,而复方解酒护肝分散片颗粒的压缩度<20%,表明提取物及包合物压缩度大,流行性不好,不易自动流出,而颗粒压缩度小,流动性好。为确定压片环境的湿度条件,对复方解酒护肝分散片颗粒进行了临界相对湿度的测定,对其吸湿性进行了评价。结果表明:相对湿度为56.5%时,颗粒吸湿率明显增加。因此,片剂制备过程中应严格控制环境湿度。5.葛根异黄酮提取物及葛花异黄酮提取物解酒护肝的体外活性试验解酒护肝的体外活性试验中,采用瓦勒霍赫(Vallee&Hoch)法与连苯三酚自氧化法研究不同剂量的葛花、葛根异黄酮提取物等对乙醇脱氢酶(ADH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性影响。结果表明:葛花异黄酮提取物和葛根异黄酮提取物都对ADH、SOD起激活作用,但葛根异黄酮提取物的激活作用弱于葛花异黄酮提取物。并且随着剂量的增加,影响效果明显增加。因此,本研究取1.2倍葛根异黄酮提取物对ADH、SOD的激活率为61.23%,35.84%,接近于葛花异黄酮提取物对ADH(63.35%)、SOD(36.10%)激活率。6.复方解酒护肝分散片的制备在文献资料和预实验的基础上,通过对影响因素的考察及处方比例的调整,采用星点设计—效应面法,选择(PVPP+CMS-Na)用量、(PVPP+CMS-Na)配伍使用比例、乙醇分数为考察因素,以崩解时限为考察指标筛选出复方解酒护肝分散片的最佳处方与工艺,(PVPP+CMS-Na)用量:10.06%,PVPP:CMS-Na=2:1,乙醇浓度:87.69%,崩解时限为:67 s,10 min溶出度达到96.74%。7.复方解酒护肝分散片的质量检查及稳定性试验在复方解酒护肝分散片的质量检查的研究中,进行了性状、薄层鉴别、重量差异、硬度、崩解时限、分散均匀性、溶出度及含量测定的检查,各项指标均符合《中国药典》(2015版)规定。体外溶出度对比试验结果显示:复方解酒护肝分散片10 min溶出度达90%以上,而复方葛根异黄酮分散片只有10%左右。对溶解度低、溶出速率小的药物分子进行包合,能提高它们的溶解度、增大溶出速率、有利于提高生物利用度。复方解酒护肝分散片及复方葛花分散片体外酶活性试验结果显示:对ADH的激活率为复方葛花分散片(77.34%)>复方解酒护肝分散片(70.40%)>解酒灵(64.27%);对SOD的激活率为复方葛花分散片(46.08%)>复方解酒护肝分散片(45.23%)>解酒灵(42.57%)。表明葛根对ADH、SOD的激活率与葛花相近,表明葛根可以很好地代替葛花且其解酒护肝效果优于市售的解酒灵。影响因素试验结果显示:在高温、高湿条件下复方解酒护肝分散片的外观、性状有所差异,但其硬度、含量、溶出度均变化不大,而光照条件下各项指标均无明显差异,综合考虑,应置干燥低温条件下保存。本研究的意义在于为解酒护肝领域提供了一种速释、高效、实用性强的解酒护肝保健品,通过以上研究结果表明,复方解酒护肝分散片的提取与制备工艺合理,质量控制方法可行,稳定性良好,对ADH、SOD起激活作用,具有解酒护肝作用。