芦荟多糖对UVB辐射人角质形成细胞氧化损伤的保护作用

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目的:探讨芦荟多糖(AP)在紫外辐射HaCaT细胞氧化损伤中的保护作用。方法:1.细胞培养:HaCaT细胞以MEM-EBSS为培养基,接种于培养瓶后置于37℃、5%CO2饱和湿度的培养箱培养。等到细胞覆盖培养瓶壁面积的90%(即细胞90%融合,一般需要2-3天)时,制备细胞悬液,按1:3比例分装传代;2.确定UVB最适辐射剂量:HaCaT细胞暴露于UVB灯管下(电压220V,功率8瓦),照射时接种有细胞的培养板中心距灯管垂直距离为10cm,紫外辐射计测定(剂量:30mj/cm2),按照实验分组照射相应时间后,MTT法测细胞光密度值(OD值)、台盼兰染色计算细胞存活率以及倒置相差显微镜下观察细胞的形态,综合分析后制定UVB最佳照射剂量的方案;3.AP处理及指标检测:按照UVB最佳照射剂量细胞接受辐射150s后,立即向被辐射细胞的培养板中加入AP,24h后(待细胞过了潜伏期进入对数生长期),生化比色法检测抗氧化酶有超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)的活性变化,MTT测定细胞增殖能力。结果:1.最佳辐射剂量:细胞经UVB辐射150s后(剂量为30mj/cm2),细胞的分裂活性及存活率均较正常细胞明显降低,此时在倒置相差显微镜下观察,细胞严重水肿、缩小呈圆形或不规则状,细胞之间没有衔接、相互分散,细胞碎片增多,继续培养损伤可修复,以40-50mj/cm2辐射,细胞悬浮于培养基表面,出现不可逆转的凋亡,因此确定中波紫外线的最佳辐射剂量为30mj/cm2;2.AP对细胞分裂能力及抗氧化酶活性影响:UVB照射组OD值显著低于空白对照组(P<0.05),AP处理组OD值虽仍低于空白对照组,但明显高于UVB照射组(P<0.05),AP高低浓度组之间OD值差异有统计学意义(P<0.05);UVB产生的ROS消耗了细胞内SOD、GSH-Px,而AP可以对抗这种消耗(P<0.05),UVB使得细胞MDA的含量显著升高,而AP可以减少MDA的生成(P<0.05)。结论:1.小剂量(<20mj/cm2)的中波紫外线辐射HaCaT细胞,可激活细胞的分裂能力,而大剂量(>30mj/cm2)的辐射则使细胞分裂受到抑制;2.UVB可能是通过氧化应激途径损伤细胞;AP能增强受UVB照射的HaCaT细胞内抗氧化酶活性,显著地拮抗UVB照射所引起的角质细胞氧化损伤。
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