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本实验采用改良的冷乙醇沉淀法,从血浆F-Ⅳ组分中提取纯化人血浆载脂蛋白A-Ⅰ(Apolipoprotein A-Ⅰ,ApoA-Ⅰ),经聚乙二醇浓缩后,用150 mmol/L磷酸缓冲液透析,得到可用于实验用纯化的ApoA-Ⅰ。用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和蛋白免疫印迹法(westernblot)鉴定分离得到的蛋白为纯化的ApoA-Ⅰ。对LTA激活的巨噬细胞细胞毒性抑制作用的实验显示,制备得到的ApoA-Ⅰ具有生物活性。用磷脂壁酸(LTA)激活小鼠腹腔巨噬细胞,加入不同浓度ApoA-Ⅰ(终浓度分别为0,10,50,100μg/ml)共同培育,3小时后将巨噬细胞上清液加到L-929细胞中,MTT法检测LTA激活的巨噬细胞释放的细胞因子对L-929细胞的杀伤作用。结果表明,ApoA-Ⅰ显著降低LTA激活的巨噬细胞造成的L-929细胞的死亡率,且这种作用具有剂量效应:LTA组L-929细胞死亡率为(51.32±5.06)%,10μg/ml Apo A-Ⅰ+LTA组L-929细胞死亡率为(46.33±1.95)%,50μg/ml Apo A-Ⅰ+LTA组L-929细胞死亡率为(33.10±2.71)%(P＜0.01),100μg/ml Apo A-Ⅰ+LTA组L-929细胞死亡率为(29.62±1.36)%(P＜0.01),50μg/ml Aoo A-Ⅰ+10%LFF+LTA组L-929细胞死亡率为(15.73±0.65)%(P＜0.01),LTA+10%LFF组L-929细胞死亡率为(45.47±5.06)%。本实验说明,ApoA-Ⅰ可以明显抑制LTA激活的巨噬细胞释放细胞因子,且ApoA-Ⅰ的作用具有剂量效应,而且,10%无脂蛋白血浆本身没有抑制LTA激活巨噬细胞的功能,却可以加强ApoA-Ⅰ的保护功能。小鼠腹腔巨噬细胞用LTA激活,并且同时给予ApoA-Ⅰ处理,37℃培养48小时后,PBS清洗并用4%的甲醛固定15分钟,封闭液处理一小时后加入分别加入NF-κB p65抗体,辣根过氧化物酶标记的抗兔二抗,置于荧光显微镜下观察,发现与对照组相比,给予ApoA-Ⅰ后LTA诱导的巨噬细胞中NFκB激活和核转位可以被抑制。给小鼠腹腔注射LTA,造成脓毒血症后,尾静脉注射ApoA-Ⅰ进行治疗(对照组注射生理盐水)。观察24小时后,取血和肺灌洗液,测定白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的浓度。同时,取小鼠肺组织做病理切片,观察组织病理变化。结果表明,ApoA-Ⅰ能够显著降低血浆中IL-1β和TNF-α的水平:对照组中IL-1β和TNF-α的浓度分别为(217.33±19.31) pg/ml和(86.94±20.17)pg/ml,ApoA-Ⅰ治疗组中IL-1β和TNF-α的浓度分别为(86.88±17.58)pg/ml(P＜0.01)和(59.66±20.33)pg/ml(P＜0.05)。同时,ApoA-Ⅰ能够显著降低肺灌洗液中IL-1β和TNF-α的水平:对照组中IL-1β和TNF-α的浓度分别为(182.50±23.24)pg/ml和(69.41±9.81)pg/ml,ApoA-Ⅰ治疗组中IL-1β和TNF-α的浓度分别为(150.25±13.67)pg/ml(P＜0.01)和(45.75±7.57)pg/ml(P＜0.01)。另外,组织病理分析表明,ApoA-Ⅰ可以减轻LTA诱导的小鼠急性肺损伤及炎症反应。上述结果说明ApoA-Ⅰ在LTA诱导的小鼠急性肺损伤中具有良好的治疗作用。将ApoA-Ⅰ和LTA的混合物分别用考马斯亮兰和苏丹黑染色后进行琼脂糖凝胶电泳,发现两种染色均只有同样位置的一条条带,说明ApoA-Ⅰ和LTA在体外也可以直接结合。以上实验结果表明:1、ApoA-Ⅰ在LTA诱导的小鼠系统性炎症和急性肺损伤中具有良好的治疗作用;2、ApoA-Ⅰ在小鼠败血症中具有良好的治疗作用;3、ApoA-Ⅰ可能通过两条途径抑制巨噬细胞激活:(1)细胞外结合并中和LTA,阻断LTA对巨噬细胞的激活;(2)细胞内阻断激活的巨噬细胞的信号传导通路(NFκB的激活和核转位),抑制炎症介质的释放。