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研究目的:衰老是生物必然面对的生理过程,对衰老机制的研究,有利于人类延长寿命保持机体功能。线粒体作为细胞内的能量工厂,是维持细胞功能的主要动力来源。当线粒体功能异常时,细胞的生存状态就会改变,进而影响组织器官的功能,导致机体的功能异常,如,衰老、癌症等。有研究表明,自噬作为细胞自身清除和保护机制,可能对衰老有直接的影响。线粒体自噬特异性地清除功能异常的线粒体,避免细胞凋亡或者坏死。有研究报道,在动物实验中线粒体自噬参与了红细胞成熟,神经退行性疾病等发生过程。本研究以15月龄衰老小鼠骨骼肌为研究对象,观察耐力运动后线粒体力能学、自噬及线粒体自噬的情况,探讨运动如何影响线粒体功能、自噬及线粒体自噬水平,以及线粒体自噬发生对于衰老小鼠骨骼肌线粒体功能的影响,并为运动延缓衰老提供理论依据。研究方法:6-8周龄雄性C57BL/6小鼠20只,随机分为安静组(C组)和运动组(E组)。采用耐力跑台运动,小鼠13月龄进行8周耐力跑台训练。每周训练5天,每天40分钟,12米/分(75%VO2max)。运动24小时后处死。每组10只。1)取腓肠肌制备新鲜的线粒体,采用Clark氧电极法检测腓肠肌线粒体呼吸态3(S3)、态4(S4)和呼吸控制比(RCR),荧光素-荧光素酶发光法检测线粒体ATP酶合成速率,荧光分光光度计检测线粒体膜电位以及线粒体ROS生成速率;2)实时荧光定量PCR检测Beclin1、Bcl-2、Bax、Bnip3、Nix、HIF-1α mRNA表达;3)Western-blotting法检测Beclin1、Bcl-2、Bax蛋白水平。研究结果:1)实验前、后,C组和E组间小鼠体重变化无显著性;2)E组线粒体呼吸态3、态4、RCR及ATP酶合成活力较C组显著升高(分别:P<0.05,P<0.05,P<0.01,P<0.05);3)E组线粒体膜电位MP较C组有显著升高(P<0.05);4)E组ROS生成速率较C组显著降低(P<0.05);5)E组Beclin1mRNA表达和蛋白水平较C组显著下降(分别:P<0.05,P<0.01);E组Bcl-2mRNA表达和蛋白水平较C组显著升高(分别:P<0.01,P<0.05);6)E组Bax mRNA表达和蛋白水平较C组无显著变化,E组Bcl-2/Bax蛋白比值较C组显著增高(P<0.01);7)E组Bnip3mRNA和Nix mRNA表达较C组无显著变化;8)E组HIF-1α mRNA表达无显著变化。研究结论:1)8周耐力训练提高衰老小鼠骨骼肌线粒体呼吸功能和膜电位,显著改善线粒体整体功能;2)8周耐力训练降低衰老小鼠骨骼肌线粒体ROS生成水平和自噬水平,推测ROS生成的减少降低了对自噬的诱导作用;3)8周耐力训练未影响衰老小鼠骨骼肌线粒体自噬水平,可能与线粒体功能适应性提高有关。