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本文研究了水体中氨氮对青鱼(Mylopharyngodon piceus)幼鱼的急性毒性和亚致死毒性效应,初步了解氨氮对青鱼的毒性机制,并探讨了饲料中添加维生素C和E对青鱼幼鱼营养调节能力和抗应激能力的影响。研究结果不仅为水产养殖动物毒性学和营养免疫学提供基础科学资料,还可对水产养殖鱼类环境应激评价体系的建立和营养调控抗应激能力提供参考依据,有助于水产养殖业的可持续发展。1.采用常规生物毒性试验方法,研究了氨氮对青鱼幼鱼(7.9±0.4g)存活的影响。结果表明：氨氮毒性与氨氮浓度和毒性时间呈正相关。在水温26±1℃,pH7.4±0.1,溶解氧6.0mg/L以上条件下,氨氮对青鱼幼鱼24、48、72、96h的半致死浓度：总氨氮浓度分别为80.98、59.56、44.33、36.40mg/L,分子氨浓度分别为1.21、0.89、0.66、0.54mg/L。总氨氮的安全浓度为3.64mg/L,非离子氨的安全浓度为0.054mg/L。2.以初始体重7.004±0.14g的青鱼幼鱼为研究对象,研究氨氮胁迫对其鳃丝NKA、组织结构及血清部分生理生化指标的影响。实验设置低(对照组；0mg/L)、中(10mg/L)和高(20mg/L)三个氨氮浓度处理组,将暂养在自然淡水(对照)中的青鱼幼鱼分别放入各实验梯度中,进行0、6、12、24、48和96h氨氮胁迫。结果表明：与对照组相比,中、高氨氮组鳃丝NKA分别在12h和6h降至最低,然后升高,48h达最大值,96h后与对照组水平相当。鳃组织光镜观察表明,中氨氮组鳃小片基部泌氯细胞数量12h有所增加,24h呼吸上皮细胞出现部分脱落,96h泌氯细胞出现空泡化,部分鳃小片充血；而高氨氮组鳃小片基部泌氯细胞数量6h呈增加趋势,12h呼吸上皮细胞部分脱落,24h大面积脱落,96h鳃小片基部严重充血。血清皮质醇和血糖含量在胁迫12h均升高至最大,含量与氨氮浓度呈正相关,48h恢复至对照组水平。氨氮胁迫下,血清T-SOD呈先升高后降低的趋势,6h时显著高于对照组(P<0.05),中氨氮组12h后与对照组差异不显著,而高氨氮组96h时显著低于对照组(P<0.05)。CAT12h内均呈先降低后升高趋势,48h均恢复至对照组水平。氨氮胁迫前期,血清T-AOC和GSH均呈下降趋势,MDA和ALT呈升高趋势。GSH和ALT在96h恢复至对照组水平,而MDA96h仍显著高于对照组,高氨氮组T-AOC显著低于对照组(P<0.05)。由此可见,氨氮胁迫初期,鱼体产生应激反应,机体抗氧化系统受到严重干扰,脂质过氧化产物增多。随着胁迫时间延长,鱼体进行适应性生理调节,但机体抗氧化能力下降,鳃组织已受到损伤。3.以初始体质量7.02±0.13g的青鱼为研究对象,在基础饲料中分别添加0(对照组)、50、100、200、400和800mg/kg的VC-磷酸酯(VC),配制6种等氮等能实验饲料,养殖8周后,根据生长情况,选取0、200和800mg/kg VC-磷酸酯添加组进行24h氨氮胁迫(20mg/L),研究VC对青鱼幼鱼生长、免疫及抗氨氮胁迫能力的影响。结果显示,以特定生长率为指标,折线模型分析表明青鱼VC适宜需要量为252.0mg/kg。肌肉和肝脏中VC积累量与饲料中VC含量呈正相关性,但VC添加量达到400mg/kg时,肌肉和肝脏中VC积累量达到饱和。饲料中添加VC对血清T-SOD活性和MDA含量无显著影响,但显著提高了血清GSH-px和CAT活性(P<0.05),其中CAT活性随饲料中VC含量的升高呈先升高后降低趋势；随着饲料中VC添加量的增加,血清中GSH含量和鳃丝NKA活力呈升高趋势,血清皮质醇含量呈先下降后升高趋势。24h氨氮胁迫显示,氨氮胁迫使肝脏VC含量、血清T-SOD、CAT、GSH-px活性、GSH含量和鳃丝NKA活性降低,血清皮质醇和MDA含量增加。对照组T-SOD、CAT、NKA活性、GSH、MDA和皮质醇含量胁迫前后均差异显著(P<0.05)。然而,与对照组相比,饲喂补充VC的青鱼氨氮胁迫前后肝脏VC含量均显著降低(P<0.05),但CAT、NKA活力、GSH、皮质醇含量均无显著变化。200mg/kg VC添加组T-SOD活性胁迫前后无显著差异,但GSH-px活性和MDA含量胁迫前后差异显著(P<0.05),而800mg/kg VC添加组GSH-px活力和MDA含量胁迫前后差异不显著,仅T-SOD活性显著降低(P<0.05)。综上所述,青鱼获得最好生长的饲料VC-磷酸酯添加量为252mg/kg,氨氮胁迫使青鱼产生免疫应激反应,而补充VC-磷酸酯可有效增强机体免疫,缓解机体免疫应激,改善青鱼抗氨氮胁迫能力。4.以初始质量7.02±0.13g的青鱼为研究对象,在基础饲料中分别添加0(对照组)、25、50、100、200和400mg/kg VE-醋酸酯,配制6种等氮等能的试验饲料,养殖8周后,根据生长情况选取0、100和400mg/kg VE-醋酸酯试验组进行24h氨氮胁迫(20mg/L),研究VE对青鱼幼鱼生长、免疫及抗氨氮胁迫能力的影响。结果表明：以特定生长率为指标,折线模型分析表明青鱼VE适宜需要量为130.0mg/kg。肌肉和肝脏中VE积累量与饲料中VE添加量呈明显正相关,当添加量超过200mg/kg时,肌肉和肝脏VE含量均达到饱和。VE对鳃丝NKA活性和血清皮质醇无显著影响,但随着饲料VE含量的升高,CAT和T-SOD活性呈上升趋势,MDA含量呈下降趋势。氨氮胁迫对各处理组肌肉VE含量和血清CAT活性无影响,但肝脏VE含量均显著降低(P<0.05)。胁迫后,对照组血清T-SOD、鳃丝NKA活性显著降低,皮质醇含量显著增加(P<0.05)。与对照组相比,两VE添加T-SOD、NKA活性和皮质醇含量胁迫前后无显著变化。各处理组MDA含量肋、迫后虽均显著升高,但400ma/kg VE添加组胁迫后MDA含量仍显著低于对照组(P<0.05)。以上结果说明,青鱼幼鱼获得最大生长的VE适宜添加量为130mg/kg,且较高VE含量能有效提高青鱼机体免疫,缓解氨氮胁迫对青鱼机体的负面影响。