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目的:构建重组人剪接型X盒结合蛋白1(X-box binding protein1spliced,XBP1S)腺病毒载体,并探讨其对软骨细胞分化的影响。
方法:应用AdEasyTM载体系统,构建并包装Ad-XBP1S腺病毒颗粒。测定病毒滴度用于后续试验。构建和包装靶向XBP1S的siRNA重组腺病毒颗粒(详见第一、二部分)。微团培养C3H10T1/2、BMSC及ATDC5细胞,在BMP1诱导不同时间点分别感染Ad-XBP1S、siXBP1S、GFP,检测软骨分化相关基因的表达;检测XBP1S是否与Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor-2,Runx2)结合形成复合物,进而探讨XBP1S调控软骨细胞分化与肥大的分子机制。
结果:成功构建重组腺病毒Ad-XBP1S与Ad-XBP1S siRNA;体内、外实验均证明XBP1S在软骨细胞分化过程中的表达;通过对软骨细胞分化相关标志基因的检测,证实XBP1S促进软骨细胞的肥大与分化;XBP1S促进Runx2介导的软骨细胞的分化与肥大;XBP1S通过调控IHH/PTHrP信号通路促进软骨细胞的分化。
结论:XBP1S通过充当Runx2的辅因子,抑制IHH/PTHrP信号通路调控软骨细胞的肥大和分化,XBP1S是调控软骨细胞肥大与分化的一个新型调控因子。