本研究将在以往的实验基础上，将TGF-β1成熟肽(TransformingGrowthFactor-beta1MaturePeptide，TGF-β1MP)基因转入组织工程角膜种子细胞中，再种植于保留有后弹力膜、经冷冻脱水处理的猪角膜基质载体上，构建转基因后板层人工生物角膜，并进行实验性移植。本课题旨在探讨一种可降低角膜移植排斥反应的基因治疗方法，同时可解决角膜供体材料来源匮乏问题，为组织工程角膜的构建和移植提供实验依据。 第一部分真核表达载体pSecTag2-TGFβ1MP的构建1.目的构建pSecTag2-TGFβ1MP高效真核表达载体，为下一步基因转染后板层人工生物角膜奠定实验基础；第二部分TGF-β1对培养角膜细胞生物学活性的影响1.目的在进行TGF-β1MP基因转染之前，探究TGF-β1对角膜三种细胞生物学活性的影响，以便在发挥其免疫抑制作用的同时尽可能减少其它生物学效应的负面影响，提前采取措施加以预防；第三部分TGF-β1成熟肽基因的转染及表达一、TGF-β1NP基因转染角膜内皮和角膜基质细胞1.目的探讨外源基因在培养的兔角膜内皮细胞和角膜基质细胞的转染效率，转染过程对角膜细胞生长情况的影响。观察绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)基因与TGF-β1MP基因共转染后的表达情况，为下一步转染细胞的移植提供活体示踪系统；第四部分体外构建转基因后板层人工生物角膜移植的研究1.目的研究转基因角膜细胞在冷冻脱水保存的猪角膜基质载体上的生存情况；并利用绿色荧光蛋白作为示踪系统，揭示人工生物角膜移植后细胞在活体的生存情况，探讨外源基因在体内环境下能否正常表达并发挥抗移植排斥反应作用。