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目的:使用Ang II诱导心肌成纤维细胞纤维化,应用携带β3-AR基因片段的慢病毒感染、β3-AR激动剂及拮抗剂的方法对心肌成纤维细胞进行干预,观察β3-AR对心肌成纤维细胞纤维化的影响,探讨β3-AR与TGF-β/Smad信号通路对心肌成纤维细胞纤维化的作用,证明β3-AR激活后可能通过TGF-β/Smad信号通路介导心肌成纤维细胞纤维化,促进心肌重构。方法:使用差速贴壁法分离培养心肌成纤维细胞,分别用携带β3-AR基因片段的慢病毒感染、β3-AR激动剂及拮抗剂干预心肌成纤维细胞,流式仪检测心肌成纤维细胞的最佳慢病毒感染率,筛选出慢病毒对心肌成纤维细胞的最适感染复数。用膜蛋白试剂盒提取心肌成纤维细胞β3-AR膜蛋白,普通试剂盒提取总蛋白,BCA法进行蛋白定量,Western blot法检测各样品中β3-AR蛋白的特异性,分别观察慢病毒感染和β3-AR激动剂拮抗剂诱导的心肌成纤维细胞中β3-AR及纤维化相关因子的表达水平及其相关性。Western blot和q RT-PCR检测各组TGF-β/Smad信号通路及纤维化相关因子COL-I、COL-III蛋白表达和m RNA的水平。WST-1法检测各组心肌成纤维细胞增殖情况。实验分组1:正常对照组;慢病毒感染组:携带β3-AR的慢病毒感染心肌成纤维细胞1h后再加入Ang II培养72h;空病毒对照组:空的慢病毒感染心肌成纤维细胞1h后再加入Ang II培养72h;Ang II组:加入Ang II培养72h。实验分组2:正常对照组;BRL组:先加入BRL,1h后加入Ang II培养72h;SR组:先加入SR,1h后加入Ang II培养72h;Ang II组:加入Ang II培养72h。结果:1.慢病毒成功感染心肌成纤维细胞,最适MOI为100,感染72h时效果最佳,感染率达到72.9﹪;2.Western blot检测结果示:慢病毒感染及激动剂干预都能使心肌成纤维细胞β3-AR高表达,较正常对照组及Ang II组均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),慢病毒感染组β3-AR表达高于激动剂干预组,但差异无统计学意义(P>0.05),拮抗剂干预组β3-AR表达较Ang II组降低,差异均有统计学意义(P<0.05);3.Western blot检测结果示:慢病毒感染组心肌成纤维细胞中TGF-β/Smad信号通路及纤维化相关因子COL-I、COL-III蛋白表达水平较空病毒感染组、Ang II组及正常对照组相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),空病毒感染组与Ang II组表达水平无明显差别(P>0.05),但均高于正常对照组(P<0.05),β3-AR激动剂干预组表达高于β3-AR拮抗剂干预组、Ang II组和正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),β3-AR拮抗剂干预组表达较Ang II组降低,但仍高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);4.q RT-PCR检测慢病毒感染组心肌成纤维细胞中TGF-β1、COL-I、COL-III m RNA水平与空病毒感染组、Ang II组及正常对照组相比均升高,差异均有统计学意义(P<0.05),空病毒感染组与Ang II组无明显差别(P>0.05),但均高于正常对照组(P<0.05),β3-AR激动剂干预组TGF-β1、COL-I、COL-III m RNA水平高于β3-AR拮抗剂干预组、Ang II组和正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),β3-AR拮抗剂干预组水平较Ang II组降低,但仍高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);5.WST-1测心肌成纤维细胞增殖情况:慢病毒感染组心肌成纤维细胞增殖水平与空病毒感染组、Ang II组及正常对照组相比均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),空病毒感染组与Ang II组无明显差别(P>0.05),但均高于正常对照组(P<0.05),β3-AR激动剂干预组较拮抗剂干预组、Ang II组及正常对照组相比增殖水平均增高,差异均有统计学意义(P<0.05),β3-AR拮抗剂干预组增殖水平较Ang II组降低,但仍高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.慢病毒感染和β3-AR激动剂干预心肌成纤维细胞均能使β3-AR过表达;2.β3-AR过表达可促进心肌成纤维细胞增殖和纤维化;3.β3-AR过表达可能通过TGF-β/Smad信号通路介导心肌成纤维细胞纤维化,促进心肌重构,参与心力衰竭的进展。