无细胞蛋白表达系统又称为体外翻译系统,是一种相对胞内表达系统而言的开放表达系统。它以外源mRNA或DNA为模板,在细胞抽提物的酶系中补充底物和能量来合成蛋白质。随着生物组学时代的到来,无细胞蛋白质合成系统显示出快速、方便、易于高通量等优点,因而应用范围不断增加。 大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统是一种以外源mRNA或DNA为模板,利用大肠杆菌细胞抽提物的酶系,通过添加氨基酸、T7 RNA聚合酶和能量物质等来表达蛋白质的体外翻译系统。本论文开展大肠杆菌无细胞蛋白合成系统的构建工作,采用正交法对该系统进行优化,提高了大肠杆菌无细胞蛋白合成系统的合成目标蛋白质的能力。构建了6种HIV基因的大肠杆菌无细胞表达载体,并且选取HIV病毒感染因子(Vif)作为目标蛋白,在大肠杆菌无细胞蛋白质合成系统得到了表达,为将来高通量抗HIV药物得筛选奠定了一定的基础。最后,构建了适宜体外表达S-腺苷-L-甲硫氨酸合成酶和5-氨基乙酰丙酸合成酶的表达载体,为将来在无细胞体系中表达具有生物活性的酶开展了探索性工作。