自然杀伤(Natural killer,NK)细胞是哺乳动物以及其他脊椎动物天然免疫系统的重要组成部分,具有抗肿瘤、抗病毒感染的作用。NK细胞发挥杀伤功能与活化性受体与抑制性受体介导的信号传递有关。近年来,鸡NK细胞的研究也逐渐受到重视,研究的主要困难在于缺乏确定的NK细胞表面标志。b-nk基因编码的BNK蛋白是表达于鸡NK细胞表面的C型凝集素样受体蛋白。BNK是高度糖基化的Ⅱ型跨膜蛋白,胞质尾区有一个免疫受体酪氨酸抑制基序,与哺乳动物NK细胞受体结构相似,因此推测BNK蛋白是鸡NK细胞的潜在受体。b-nk基因位于鸡的主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)核心区域,与MHC-B核心基因紧密连锁。本研究利用国家禽类实验动物种子中心保存的MHC单倍型鸡BW/G1等6个品系,包括B19、B21等MHC-B单倍型,根据NCBI上公布的不同单倍型鸡的b-nk基因序列,比较了单倍型鸡的b-nk基因多态性,生物信息学分析结果与标准单倍型序列完全一致,表明可以利用b-nk基因进行MHC单倍型鸡遗传稳定性监测,同时也为后续实验提供了实验材料。以对多种疫病有较强敏感性的B19单倍型鸡b-nk基因原核表达蛋白(BNK19)免疫小鼠,建立间接ELISA方法,筛选获得一株单克隆抗体杂交瘤细胞株7A10,与原核表达的BNK21没有Western Blot反应性,具有鉴别意义。截短表达分析结果表明,7A10针对表位在E149-S168之间。从B19单倍型鸡外周血中分离淋巴细胞,刀豆素-A刺激后,提取细胞总RNA,RT-PCR方法扩增b-nk19基因,插入真核表达载体pIRES,成功构建真核表达载体pIRES-BNK19,转染CHO细胞系,用G418加压筛选获得稳定表达BNK19的细胞系。7A10单抗能够通过Western Blot检测到鸡外周血淋巴细胞中BNK蛋白的表达。利用流式细胞仪检测,7A10标记细胞占鸡外周血淋巴细胞的16.7%。本实验为BNK蛋白在鸡NK细胞中的分子机制研究提供了基础。