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实验目的:目前干细胞疗法成为软骨修复领域新的研究方向,以间充质干细胞(MSCs)为细胞源构建的无支架组织工程体(TEC)在修复软骨损伤方面已取得较好的治疗效果。本研究通过提取、扩增猪关节液间充质干细胞(SFMSCs),并采用组织工程技术构建无支架间充质干细胞组织工程构建体(SFMSCs-TEC),然后移植修复小型猪膝关节软骨缺损,并与目前常使用的MSC复合透明质酸(HA)注射方法相对比,评价SFMSCs-TEC移植修复软骨缺损的效果。实验方法:采集5只6月龄五指山猪膝关节液,分离、培养得到大量SFMSCs,采用组织工程技术构建无支架SFMSCs-TEC,双侧股骨滑车制作软骨缺损模型,左侧采用所构建的TEC进行软骨缺损修复(SFMSCs-TEC组),右侧采用SFMSCs复合HA注射方法进行治疗(SFMSCs-HA组),术后3月分别对两组取材,行大体观察、MR影像学检查、HE染色、甲苯胺蓝染色、CollagenⅡ免疫组化染色,并参照国际软骨修复协会(ICRS)软骨修复评分系统进行大体评分和组织学评分,统计学分析评价两组修复效果。实验结果:以猪关节液间充质干细胞为细胞源,成功构建了无支架SFMSCs-TEC。术后3月两组实验结果:(1)大体观察:SFMSCs-TEC组软骨缺损部位基本被灰白色软骨样组织填充,表面相对平整,修复组织与正常组织分界模糊。SFMSCs-HA组软骨缺损部位仍可见明显的凹陷,灰白色软骨组织较薄,与周围分界明显,部分样本均可见明显的滑膜炎及关节积液表现。(2)MR影像学检查:SFMSCs-TEC组和SFMSCs-HA组比较,修复组织的表面及内部信号、软骨下骨水肿信号、关节腔关节液信号,前者均好于对照组。(3)HE染色、甲苯胺蓝染色、CollagenⅡ免疫组化染色显示SFMSCs-TEC组可见新生透明软骨,与周围正常组织分界模糊,细胞外基质异染阳性,SFMSCs-HA组可见纤维软骨修复,与周围正常组织分界清晰,细胞外基质未见异染。(4)ICRS大体评分:SFMSCs-TEC组和SFMSCs-HA组分别为9.67±1.04、5.75±1.38,两组差异比较具有统计学意义(P<0.05)ICRS组织学评分:实验组和SFMSCs-HA组分别为9.74±1.91、5.43±1.18。两组差异比较具有统计学意义(P<0.05)。实验结论:无支架SFMSCs-TEC技术与SFMSCs复合HA治疗猪膝关节软骨缺损短期效果相比较,前者具有较好的修复效果,可以更多的进行透明软骨样修复,减轻关节炎性反应。