多囊卵巢综合征卵泡发育异常的相关因素及机制研究

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第一部分:多囊卵巢综合征患者卵泡数量与临床特征及内分泌代谢异常的相关性分析目的:了解多囊卵巢综合征(PCOS)卵泡数量增多与临床特征及内分泌代谢异常的相关性,藉以了解PCOS卵泡增多的原因。方法:共收集64例符合PCOS诊断标准患者。患者接受病史询问,人体测量学,激素及生化指标测定(FSH,LH,testosterone,DHEAS,SHBG,total cholesterol,triglyceride,HDL,LDL,fasting plasma glucose,fasting insulin,AMH,FAI,HOMA),以及超声检查(卵巢体积及卵泡数),采SPSS 15.0进行相关系数及回归分析分析。P<0.05视为具统计学意义。结果:窦腔卵泡数量与FAI成显著正相关(相关系数:0.264,P=0.038,回归直线方程:y=0.638x+17.237)。窦腔卵泡数量与SHBG成显著负相关(相关系数:-0.317,P=0.019,回归直线方程:y=-0.026x+23.611)。窦腔卵泡数量与AMH成显著正相关(相关系数:0.515,P<0.001,回归直线方程:y=0.398x+15.832)。窦腔卵泡数量与卵巢体积成显著正相关(相关系数:0.322,P=0.011,回归直线方程:y=0.207x+17.468)。卵泡数量与其余变量,包括年龄,BMI,WHR,FSH,LH,DHEAS,TC,TG,HDL,LDL,空腹葡萄糖,空腹胰岛素等,相关性都未达显著水平。结论:雄激素活性,卵巢体积,及AMH是PCOS卵巢卵泡数量的相关因素,其中卵巢体积增加以及血液AMH浓度增高可能是卵泡数量增多的结果,而高雄激素可能是卵泡数量增多的原因。第二部分:睾酮,胰岛素,及黄体生成素对离体培养的大鼠窦前卵泡颗粒细胞AMH表达的影响目的:研究雄激素,胰岛素及黄体生成素对颗粒细胞AMH表达的影响,藉以了解PCOS卵泡增多的可能机制。方法:取大鼠窦前卵泡颗粒细胞进行离体培养。1.培养液中分别加入10-7M睾酮,100ng/mL胰岛素,或是10ng/mL黄体生成素,24小时后收获细胞测定AMH mRNA表达水平。2.时效分析,培养液中加入10-7M睾酮,于0,1,4,12,24小时后测定AMH及AMH二型受体mRNA表达。3.量效分析,培养液中加入10-9M至10-5M不等浓度睾酮,12小时后测定AMH mRNA表达水平。4.培养液中加入或不加入睾酮(10-7M)培养,分别于0,1,2,3日收取细胞培养液测定AMH蛋白浓度。结果:1.睾酮抑制AMH mRNA表达(P<0.05),胰岛素及黄体生成素对AMH mRNA的表达没有显著影响。2.睾酮作用时间越长,AMH及AMM二型受体的mRNA表达越低,12小时达最低点。3.随着睾酮浓度的升高,AMH mRNA表达呈现逐渐下降的趋势。4.睾酮刺激后经过3日,颗粒细胞AMH分泌显著减少。结论:睾酮抑制离体培养大鼠窦前卵泡颗粒细胞AMH及AMH二型受体的表达。PCOS患者可能通过相同的机制,由高雄激素抑制局部AMH的作用,使得较多的始基卵泡进入自主发育,从而导致多囊卵巢形态。第三部分AMH及黄体生成素对离体培养的大鼠窦腔卵泡颗粒细胞FSH受体及芳香化酶表达的影响目的:研究AMH对窦腔卵泡颗粒细胞FSH受体及芳香化酶表达的影响,以了解PCOS窦腔卵泡FSH敏感性下降的原因。方法:取大鼠窦腔卵泡颗粒细胞进行体外培养。1.培养基中加入FSH 10ng/mL预处理24小时。再加入10ng/mL LH或1000ng/mL AMH,24小时后进行芳香化酶mRNA表达分析。2.培养基中加入FSH 10ng/mL预处理24小时再加入AMH(10,100或1000 ng/mL),24小时后进行芳香化酶mRNA表达分析,以及FSH受体mRNA表达分析。48小时后进行芳香化酶蛋白表达分析。结果:1.LH刺激使芳香化酶表达量显著升高,AMH刺激则使芳香化酶表达显著降低。2.随着AMH浓度的提高,芳香化酶mRNA表达有下降的趋势。加入浓度为1000 ng/ml时,下降幅度达显著水平(P<0.05)。加入AMH对FSH受体表达没有显著影响。结论:AMH造成颗粒细胞对FSH的敏感性降低,并不是通过对FSH受体表达的抑制作用,可能有其它途径。高浓度的AMH才能抑制颗粒细胞对FSH的敏感性,提示卵泡优势化障碍来自局部AMH的作用。
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