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叶酸代谢中相关基因的SNP与特发性男性不育的相关性研究全世界已婚育龄夫妇不育症高达15％，其中男性不育约占40％—50％。排除临床上常规检查能够获知的病因外，仍有约40％的患者，不育原因尚不清楚，临床上称为特发性男性不育症。由于不能做到对“症”下药，特发性男性不育的治疗效果并不理想。单精子卵胞浆注射技术等新的辅助生殖技术虽然可以帮助一些特发性男性不育症患者实现生育的梦想，但也存在男性不育缺陷基因垂直传播的危险。目前，核型检测和Y染色体微缺失已经被很多医院纳入男性不育的常规遗传检测，但是男性生精过程涉及约2000多个基因，更多的不育致病候选基因的筛选研究不仅有利于揭示特发性男性不育的发病机理，为治疗提供一定的启示，而且能够为辅助生殖之前的遗传检测提供一定的依据，提高人口出生质量。单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism，SNP)则是目前常用来识别和鉴定(男性不育)致病候选基因的有效手段。叶酸对女性生殖的作用是众所周知的，但是叶酸对男性生殖的作用却知之甚少。在利用叶酸拮抗剂治疗其他疾病的时候发现，男性生殖功能会因此受损。进一步研究发现在精液中存在叶酸的高亲和力结合蛋白，这些研究提示：叶酸可能在男性生精过程中发挥重要作用。叶酸在体内合成及代谢所涉及到的酶主要有亚甲基四氢叶酸还原酶(methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)、蛋氨酸合成酶(methionine synthase，MS)、蛋氨酸合成还原酶(methionine synthase reductase，MTRR)、胸腺嘧啶核苷酸合成酶(thymidylate synthase gene，TYMS)。这些酶的编码基因上存在众多的单核苷酸多态性，基因调控区和编码区的单核苷酸多态性可能会通过改变酶活而影响叶酸在体内的合成，从而影响生精过程。鉴于此，我们选择了上述酶编码基因上常见的多态性位点，进行了叶酸代谢相关基因的SNP与特发性男性不育的相关性研究，结果如下：第一部分MTHFR基因多态性和特发性男性不育的关系经过筛选，我们收集了165名特发性男性不育患者和132名正常已育男性的血样，运用聚合酶链式反应一限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法，我们研究了MTHFR基因677位点C→T的突变和1298位点A→C的突变，结果发现：对C677T而言，T等位基因和TT基因型在患者和对照中出现的频率没有差异，但杂合基因型CT出现的频率却表现出明显差异(P=0.026)。分析CT+TT在患者组和对照组的频率，发现P值为0.031，具有统计学上的相关性。对A1298C而言，等位基因C的频率(P=0.013)以及基因型出现的频率(P=0.013)在病人和对照组中存在明显差异。纯合突变基因型CC在正常人中出现的频率为1.520％，但在特发性男性不育中却高达9.09096，提示1298CC可能为中国男性不育患者的风险因子。我们在患者和正常对照中研究了MTHFR关于C677T和A1298C的单倍型。在患者当中主要的单倍型是CA(43.94％)接下来是TA(28.78％)，TC(18.19％)，CC(9.09％)，而在正常对照当中单倍型为CA(44.69％)，TA(36.74％)，CC(14.39％)和TC(4.18％)。单倍型TC在患者和正常对照表现出明显的统计学差异[OR 4.439，95％CI(2.233-8.825)]。第二部分MS基因A2756G多态性与特发性男性不育的关系运用PCR-RFLP的方法，我们研究了蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G在165名特发性男性不育患者和132名正常对照中的等位基因和基因型分布。结果发现：等位基因G的频率在正常对照中为10.99％，而在患者中为17.27％，两者存在明显的统计学差异[P=0.03，OR 1.692，95％CI(1.047-2.734)]，然而，蛋氨酸合成酶(MS)基因A2756G位点的三种基因型AA／AG／GG的频率在患者和正常对照当中并不存在明显的统计学差异(P=0.079)。分析AG+GG出现的频率，发现在患者和对照组中具有明显差异[P=0.025，OR 1.861，95％CI(1.076-3.217)]，提示：2756(AG+GG)基因型与特发性男性不育存在一定的相关性。第三部分MTRR基因A66G多态性与特发性男性不育的关系在165名特发性男性不育患者和132名对照中，我们研究了MTRR基因A66G的等位基因和基因型的分布，结果发现，MTRR基因A66G的等位基因G的频率在正常对照中为41％，而在患者中为55％，两者具有显著差异(P=0.001)；杂合基因型AG在患者和对照中没有统计学差异(P=0.330)，但是纯合突变型GG和基因型(AG+GG)在病人和正常已育人群中的分布却表现出显著差异(P值分别为0.001和0.035)，表明MTRR基因A66G的等位基因G和基因型GG／AG+GG与特发性男性不育具有一定的相关性。第四部分TYMS基因3’-UTR的6bp的插入或缺失多态性和特发性男性不育在TYMS基因3’-UTR端存在6bp的插入／缺失(ins／del)多态性，我们运用PCR-RFLP的方法检测了该多态性在患者和对照中的分布情况，结果发现：TYMS基因3’-UTR缺失6bp的等位基因频率，在正常对照中为25％，在患者当中为35％，二者之间没有统计学差异(P=0.09 for TYMS 3’-UTR del6)。但是，比较病人和对照组中纯合缺失基因型(del／del)的频率(P=0.026)，以及del／del+ins／del的频率(P=0.027)发现，两者均与特发性男性不育存在相关性。综上所述，这些数据与我们当初的假设基本一致，叶酸代谢相关基因多态性通过影响DNA的合成和DNA的甲基化，成为特发性男性不育的致病基因。