报告基因对iPSCs诱导分化心肌细胞线粒体形态与功能影响的实验研究

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:panzhengdang
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的诱导多功能干细胞(induced pluripotent stem cells,i PSCs)具有分化为心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)的潜能,是目前心肌梗死(myocardial infarction,MI)治疗的研究热点,三重融合(triple fusion,TF)报告基因可实现对移植后细胞生物学行为的活体、无创、时空动态监测。在i PSCs诱导分化过程中线粒体起着至关重要的作用,但是目前尚无研究阐明TF报告基因对i PSCs诱导分化心肌细胞线粒体形态与功能的影响。因此,本研究旨在探讨TF报告基因对i PSCs诱导分化心肌细胞线粒体形态与功能的影响作用。方法将诱导多功能干细胞分为两组:i PSCs组和通过同源重组敲入TF报告基因的TF-i PSCs组,且分别诱导分化为心肌细胞:i-CMs组和TF-CMs组。利用γ计数仪、正电子发射断层显像(positron emission tomography,PET)和小动物活体成像仪验证TF报告基因在体外表达情况。运用小动物活体成像仪、18F-FDG和18F-FHBG micro-PET扫描,验证心肌细胞移植一周后TF报告基因在大鼠MI模型体内表达情况。并进一步采用台盼蓝实验、Cy QUANT细胞增殖实验和免疫荧光法检测TF报告基因对i PSCs活力、增殖和分化能力的影响。最后利用活体荧光、透射电子显微镜(transmission electron microscopy,TEM)、荧光定量PCR和MTT实验检测TF报告基因对i PSCs诱导分化心肌细胞线粒体形态和功能的影响。结果TF报告基因表达情况的体外实验表明,γ计数仪和micro-PET结果显示,TF-i PSCs或TF-CMs有放射性信号摄取而i PSCs或i-CMs无放射性信号摄取;且TF-i PSCs细胞数量与生物发光成像(bioluminescence imaging,BLI)信号之间存在显著正相关(R2=0.92),i PSCs无BLI信号。体内实验证实,细胞移植一周后小动物活体成像仪和micro-PET结果显示TF-CMs在心脏内定植、存活。因此这些结果表明TF报告基因可在体内、体外稳定表达。进一步细胞实验和免疫荧光法发现TF-i PSCs与i PSCs的活力、增殖和分化能力无统计学差异。同时TF-i PSCs与i PSCs在诱导分化为心肌细胞过程中线粒体的形态和数量、线粒体内活性氧(reactive oxygen species,ROS)、线粒体膜电位、线粒体DNA拷贝数和线粒体酶活性无统计学差异。(P<0.05说明有统计学差异)。结论该研究通过构建大鼠心肌梗死模型,将分化的心肌细胞移植入损伤区域,并联合应用多种体内外监测方法证实TF报告基因可实现对移植后心肌细胞在体、无创监测,且不会对i PSCs诱导分化心肌细胞线粒体形态和功能产生影响,从而在线粒体水平证实了TF报告基因应用于干细胞移植后多模态成像的安全性。
其他文献
8月31日,教育部现代学徒制项目组老师带领28名同学赴广州南沙大酒店,广东省旅游职业技术学校2015级教育部现代学徒制试点班正式启动。  工学结合,构建现代学徒制是近年来,国家培养技术性人才的重要举措。2015年,教育部批准广东省旅游职业技术学校成为首批现代学徒制试点单位,经过一年的筹备,28名学生在选拔工作中脱颖而出,他们将在接下来的两年时间里遵照新的培养模式在南沙大酒店进行学习实践。
本文结合教学实际,重点介绍了会计课堂三种高效的教学方法,案例教学法,编排小品法和模拟庭审法,并对这些教学方法进行了详细的分析。
摘 要:初中是一个十分重要的教学阶段,在初中教学阶段当中,语文又是一个非常重要的学科。伴随着新课程改革的步伐,初中语文的教学得到了更多的关注和更加严格的要求,初中语文教师在教学的过程当中一定要以学生的实际情况和有关部门的要求为基础,同时要提高自身的能力和素质,对学生的语文应用能力进行良好的培养。  关键词:初中;语文教学;语文应用能力  语文是学生学好其他学科的基础,同时也是日常交際的基本能力。初