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木霉属(Trichoderma spp.)真菌,属于半知菌亚门,丝孢纲、丝孢目,丝孢科,木霉除个别种可导致蘑菇生产污染,造成减产外,大多数成员在农业生产上有独特的生防作用,木霉菌对人类的生产、生活和科学研究十分重要。云南省因其地理位置特殊,生物多样性丰富,但对于云南省木霉菌菌种多样性和系统发育研究少见于报道。因此,对于云南省木霉菌菌种的鉴定十分必要。本研究对采自云南省昆明、普洱、大理、丽江、保山和昭通6个地区的腐木和腐殖土壤的木霉进行分离,纯化,并对分离获得的112株木霉,采用形态学分类的方法结合ITS序列分析,对其进行分类研究;采取最大简约法(MP)和贝叶斯法构建系统发育树,探讨木霉菌菌种之间系统发育的关系。为木霉菌的物种多样性研究及分子系统学研究提供依据。研究结果如下:(1)木霉的形态学鉴定。对分离的112株木霉菌,根据形态学特征和培养性状,有105株木霉菌鉴定到种,鉴定出9种木霉菌,有7株木霉未鉴定到种。鉴定种分别为深绿木霉T. atroviride,哈茨木霉T. harzianum,康氏木霉T. koningii,长枝木霉T.longibrachiatum,里氏木霉T. reesei,钩状木霉T.hamatum,装絮木霉T. tomentosum,变绿木霉T. viridescens和盖姆斯木霉T. gamsii。其中装絮木霉T. tomentosum和盖姆斯木霉T. gamsii为中国新纪录种。变绿木霉T. viridescens为中国大陆新发现中,里氏木霉T. reesei为首次在云南省发现的木霉种。(2) ITS序列测定结果。112株菌的ITS序列(包含ITS1,5.8S,ITS2)长度为518bp-554bp,共48个单倍型。遗传距离结果显示,各组内木霉的遗传距离差异较小,其中Longibrachiatum组内差异最小。Pachybasium组和Trichoderma组间差异不大。Longibrachiatum组则与其他两组组间差异较大。(3)根据ITS区域序列构建的系统发育树,将菌株分A,B,C 3个群:A群主要是Longibrachiatum组的T. reesei和T. longibrachiatum,又可分为两个分支A1(T. reesei) ,A2(T. longibrachiatum),两个分支中都包含了它们的模式菌株。B群为Pachybasium组下的木霉,由4个分支组成,其中B1包含了哈茨木霉(SWFC8700,SWFC8710,SWFC8718 , SWFC8726 , SWFC8731 , SWFC8927 , SWFC8929 , SWFC8952 ,SWFC10236,SWFC10321和SWFC10322)和哈茨木霉Th1群的参考菌株以及装絮木霉(T.tomentosum)SWFC8667。B2中主要是哈茨木霉(SWFC8664,SWFC8672,SWFC8693,SWFC8945,SWFC8947和SWFC8954)和哈茨木霉的模式菌株。B3为哈茨木霉SWFC10216,Th2群和Th4群哈茨木霉的参考菌株以及装絮木霉的模式菌株。B4分支则是未鉴定到种的SWFC9109和卷曲木霉的模式菌株。本次研究中SWFC8667与装絮木霉的模式菌株ITS序列有一定的差异。C群为木霉属下的Trichoderma组,由5个分支组成,C1主要是本次鉴定的深绿木霉及其模式菌株以及Th3型的哈茨木霉。C2为康氏木霉(SWFC8665,SWFC8674,SWFC8675,SWFC 10317,SWFC 10319和SWFC8685)及其的模式菌株、盖姆斯木霉和两株参考盖姆斯木霉菌株以及未鉴定到种的SWFC10319。C3则是由康氏木霉SWFC8676、变绿木霉及其模式菌株组成。C4由未鉴定到种的木霉SWFC 10164,SWFC10210和SWFC10235组成。C5为钩状木霉分支,包含了鉴定的钩状木霉及其模式菌株。(4)通过ITS序列建立系统发育树,划分出了三个不同的组。其中Longibrachiatum组在发育进化中,与其他两组关系比较远。Trichoderma组和Pachybasium组在进化分支中,处于同一个进化群中,关系比较近。Longibrachiatum组为单系组,Trichoderma组和为Pachybasium组为多系组。ITS序列在组间关系上,划分比较明确。(5)本研究利用ITS序列辅助鉴定,将形态上相近的里氏木霉和长枝木霉鉴定出,明确了里氏木霉和长枝木霉为两个不同的种。对于集合种,完全利用ITS序列分析种间关系上,还存在着一定的不足之处。