目的： 建立快速、灵敏的血清5’-核苷酸酶匀相法（5-nucleotidase，5-NT）检测新技术。 方法： 通过血清5’-NT的激活技术、激活因子的缓释技术、测定试剂中的各成分的稳定技术、测定试剂的抗干扰技术等关键技术的解决，建立了嘌呤核苷磷酸化酶-黄嘌呤氧化酶-过氧化物酶（PNP-XTO-POD）偶联可见光匀相终点法测定血清5’-NT、PNP-XTO-POD偶联单一试剂可见光匀相速率法测定血清5’-NT、嘌呤核苷磷酸化酶-黄嘌呤氧化酶-尿酸酶-过氧化物酶（PNP-XTO-UAO-POD）偶联可见光匀相速率法测定血清5’-NT、PNP-XTO-POD偶联化学发光匀相终点法测定血清5’-NT的新方法。 结果： PNP-XTO-POD偶联可见光匀相终点法测定血清5’-NT，线性范围为0．1～121．9U/L，平均回收率为99．9％，批内变异系数（CV）和批间变异系数分别为0．015～0．034和0．021～0．047，与美国Diazyme Laboratores提供的5’-NT检测试剂的线性回归方程和相关系数分别为Y=0．9998X-0．068、r=0．997l，健康人群的血清5’-NT活性为0．11～11．95U/L。 PNP-XTO-POD偶联可见光匀相速率法测定血清5’-NT，线性范围为0．1～202．7U/L，平均回收率为100．8％，批内变异系数（CV）和批间变异系数分别为00．013～0．032和0．020～0．045，与美国Diazyme Laboratores提供的5’-NT检测试剂的线性回归方程和相关系数分别为Y=1．0046X-0．051，r=0．9982，健康人群的血清5’-NT活性为0．05～10．01U/L。 PNP-XTO-UAO-POD偶联可见光匀相速率法测定血清5’-NT，线性范围为0．08～200．0U/L，平均回收率为100．5％，批内变异系数（CV）和批间变异系数分别为0．011～0．028和0．018～0．043，与美国Diazyme Laboratores提供的5’-NT检测试剂的线性回归方程和相关系数分别为Y=1．0029X-0．036，r=0．9992，健康人群的血清5’-NT活性为0．03～10．07U/L。 PNP-XTO偶联化学发光匀相终点法测定血清5’-NT，线性范围为0．1～102．5U/L，平均回收率为100．7％，批内变异系数（CV）和批间变异系数分别为0．012～0．027和0．017～0．036，与美国Diazyme Laboratores提供的5’-NT检测试剂的线性回归方程和相关系数分别为Y=1．002X+0．007，r=0．9983，健康人群的血清5’-NT活性为0．31～10．99U/L。 结论： 本研究所建立的血清5’-NT匀相法检测新技术，各项方法学指标满足临床实际应用需要，具有选择性好、灵敏度高、测定简便等特点，可满足不同层次的临床实验室检测血清5’-NT的需要，适合临床推广应用。