血必净注射液对离体大鼠缺血再灌注心肌热休克蛋白70表达的实验研究

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目的心肌缺血再灌注损伤是心外科手术常见的组织器官损伤,随着器官移植等复杂手术的开展,再灌注损伤已越来越受到人们的重视。但是,到目前为止,其确切的发病机制仍不十分清楚,目前的研究主要集中在氧自由基形成、细胞内钙超载、细胞凋亡、氧及能量利用障碍等方面。有研究表明,热休克蛋白70(heat shockprotein 70 HSP70)能保护心肌收缩力,减少心肌缺血坏死范围,并且有抗心律失常作用,通过诱导热休克蛋白70的产生能够明显减轻心肌缺血再灌注损伤。近年来,中药在心肌缺血再灌注损伤的防治方面取得了一定进展,而血必净注射液就是从36组中药处方中筛选而来,其有效成分主要有丹参、川芎嗪、阿魏酸、芍药苷、红花黄色素A等,具有抗细菌毒素、降低内毒素水平、调节免疫及炎性介质、改善微循环、保护血管内皮细胞等作用,并通过提高超氧化物歧化酶活性等途径,保护和修复应激状态下受损的脏器。本研究采用离体心脏缺血再灌注损伤模型,排除了心脏在体时受神经、体液等多种因素的影响,同时也排除了药物分布、代谢等因素的干扰,观察血必净注射液对心肌的直接作用,明确其对缺血再灌注损伤心肌是否具有保护作用,并探讨其可能的机制,从而为临床合理用药提供理论依据。材料与方法1、实验动物及分组选择健康Wistar大鼠30只,雌雄不限,体重200±20g,随机分成对照组(C组)和血必净组(E组),每组15只。2、建立模型大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉后,腹腔注射肝素钠抗凝,然后将大鼠仰卧位固定于操作台上,正中剪开胸骨,小心迅速分离心脏,充分暴露心脏及大血管,在主动脉根部稍往上将主动脉和其他血管一起剪断,立即将心脏置于盛有4℃冷K-H液的弯盘中,在液面下找出主动脉断端,将主动脉插管插入,迅速接到Langendorff装置上,灌注持续通有95%O2和5%CO2混合气体的K-H液平衡15分钟,保持温度为37℃,灌注压力为75 cmH2O。C组在K-H缓冲液灌注平衡15分钟后,给予灌注ThomasⅡ停搏液使全心停搏30分钟,然后再重新灌注恒温恒压的K-H缓冲液使其复跳并继续灌注120分钟。E组在ThomasⅡ停搏液中加入血必净注射液,其余处理均同C组。实验过程中留取的冠脉回流液标本立即置于-20℃冰箱保存,实验结束时取部分心尖部组织,置于10%甲醛中固定,4℃冰箱保存,其余心肌置于-70℃冰箱保存。3、检测指标分别计量缺血前平衡灌注第10-15min、缺血再灌注后第25-30min、第85-90min的冠脉流出量,并取出其中3ml用全自动生化监测仪检测肌酸激酶的含量;用酶联免疫法测心肌中热休克蛋白70的含量;在光学显微镜下观察心肌形态学变化。4、数据分析采用SPSS13.0统计软件进行数据处理,计量资料以均数±标准差((?)±s)表示,组间比较采用重复测量数据的方差分析,两两比较用多重比较t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。结果1、血必净组酶联免疫法检测缺血再灌注120分钟心肌组织热休克蛋白70的含量与对照组比较明显增多(P<0.05)。2、血必净组与对照组在缺血前肌酸激酶含量差异无显著性(P>0.05);再灌注后相应时间段的肌酸激酶含量血必净组明显低于对照组(P<0.05)。3、血必净组与对照组在缺血前冠脉流量差异无显著性(P>0.05);再灌注后相应时间段的冠脉流量血必净组明显高于对照组(P<0.05)。4、心肌结构变化:血必净组心肌细胞基本正常,炎症细胞浸润、聚集较少;对照组心肌组织炎症细胞浸润、聚集明显。结论1、血必净注射液可以显著增加心肌组织热休克蛋白70的生成,并可能通过增加热休克蛋白70的含量来实现其心肌保护作用。2、血必净注射液可以增加缺血再灌注心肌的冠脉流出量,抑制心肌肌酸激酶的释放,对心肌产生保护作用。3、血必净注射液可以维持心肌细胞的正常结构,减轻炎症反应,保护心肌功能。
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