骨髓间充质干细胞移植治疗心梗后心力衰竭的动物实验研究

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目的:行心脏彩超和NT-proBNP检查来评价骨髓间充质干细胞(Bone marrow-derived mesenchymal stem cells BMMSCs)移植治疗急性心肌梗死后心力衰竭的左室功能改善疗效。方法:(1)骨髓细胞的提取培养:分别取2只幼兔的股骨和胫骨通过骨髓冲洗获取骨髓细胞,将骨髓细胞分离贴壁培养、纯化BMMSCs,体外扩增细胞。(2)成年家兔的研究:取12-16个月大小、重2-3kg健康家兔30只随机分成3组:A假手术组(n=10):开胸但不结扎前降支,不造成心梗;B心梗组(n=10):开胸并结扎冠状动脉左前降支造成心肌梗死;C实验组(n=10):开胸结扎冠状动脉左前降支造成心肌梗死。3组术前、术后7天、1月行心脏彩超测LVEF、LVDd、 LVDs、LVST、LVPW,A组术前、术后7天抽血检查NT-proBNP,B、C术前、术后7天、1月查NT-proBNP, B、C组心梗后7天行心脏彩超和血浆NT-proBNP检查,以LVEF<45%和NT-proBNP>300pg.ml-1判为心力衰竭,B组心梗2周后经耳缘静脉注射配好的2m10.9%生理盐水,C组心梗后2周经耳缘静脉注射2ml(2×106-8个骨髓间充质干细胞)经CM-Dil标记的第三代BMMSCs (3) C组兔子中随机抽出2只兔子在心梗后2周静脉注射经过CM-Dil标记的BMMSCs,24小时后处死动物,取出心脏,石蜡固定制成切片,荧光显微镜下可见已标记的BMMSCs。A组中取1只兔子作为对照组处死,取出心脏,石蜡固定制成切片,作为正常心肌对照组。结果:(1)心梗后7天B组与C组的LVEF值较A组均明显下降(P<0.05),B组行0.9%生理盐水注射前后心功能无变化6>0.05),C组心肌梗死后NT-proBNP明显升高,LVEF值降低,LVDd和LVDs增大,LVST、LVPW增厚,均有统计学意义(P<0.05);(2)通过心脏彩超和NT-proBNP检查,表明骨髓间充质干细胞对心梗后心力衰竭的左室功能有改善,在骨髓移植治疗组C组改善效果较A、B组相比,结果有差异(P<0.05)(3)处死兔子大体标本提示心脏体积增大,心衰模型建立成功,术后1月病理切片见梗死区室壁变薄,心肌细胞纤维化,心肌纤维紊乱,肌丝断裂、横纹不清,细胞核固缩,在荧光显微镜下可见梗死心肌区有经静脉注射用CM-Dil标记BMMSCs。结论:1.心梗后心功能不同程度的下降;2.通过心脏彩超和NT-proBNP准确判断BMMSCs移植治疗能有效改善心梗后心脏功能,符合心肌细胞的病理生理基础;3.处死兔子大体标本心脏体积增大,心衰模型建立成功,术后1月病理切片见梗死区室壁变薄,心肌细胞纤维化,心肌纤维紊乱,肌丝断裂、横纹不清,细胞核固缩,在荧光显微镜下可见梗死心肌区有经静脉注射用CM-Dil标记BMMSCs。
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