木霉几丁质酶和β-葡聚糖酶基因的诱导及其cDNA片段的克隆

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华山松(pinus armandii Franch)是我国特有的树种,也是我国西部中山至亚高山地区及长江中上游防护林体系的重要造林树种之一。近十余年来因疱锈病危害,材积生长下降、木材力学性质发生劣变降低其工艺价值。《洱源枝顶孢侵染华山松疱锈菌机理研究》课题组在过去的研究中筛选出了3株对华山松疱锈病原菌具有强烈破坏作用的木霉菌,并证实它们能通过产生细胞壁降解酶——几丁质酶和β-1,3葡聚糖酶来破坏锈孢子。木霉作为重要的生防真菌之一,已经被广泛关注,其主要作用机制是能够产生几丁质酶和β-葡聚糖酶分解真菌的细胞壁从而达到杀害有害真菌的作用。从拮抗菌,重寄生菌以及促生菌中获得抗病基因并转化到植物中获得表达是目前生物技术及生物防治的热点,而几丁质酶基因和β-葡聚糖酶基因又一直是生物防治基因研究的重点。   本论文分为三个部分:   第一部分介绍了华山松疱锈病的防治研究进展,木霉菌的应用及生防机制以及胞壁降解酶的主要酶类——几丁质酶和β-葡聚糖酶的研究进展。   第二部分为胞壁降解酶基因表达的诱导。以锈孢子壁为诱导物对这2株木酶进行诱导,诱导重寄生真菌木霉LS020(Trlchoderma wride)和木霉SS003(Trlchodermaa troviride)中胞壁降解酶:几丁质酶和β-葡聚糖酶的表达,检验结果显示这两种酶在这两株菌种中均获得了一定量的表达,而木霉SS003中表达的酶活性明显比木霉LS020高。   第三部分为基因片断的克隆。以木霉LS020(Trichoderma wride)和木霉SS003(Trichoderma atroviride)菌丝为材料、采用RT-PCR方法扩增并克隆出长度约为800bp的基因片断,经过比对,可以推导获得的基因片断为几丁质酶。
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