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二恶英类化合物(Dioxin-Like Chemicals, DLCs)是包括多氯代二苯并二恶英(polychlorinated dibenzo-p-dioxins, PCDDs),多氯代二苯并呋喃(polychlorinated dibenzofurans, PCDFs)和共平面多氯联苯(polychlorinated biphenyls, PCBs)等一大类化合物的总称,由于其在环境中分布广泛,不易于生物及化学降解,毒性高以及生物富集和生物放大的特性,对人和生态环境构成严重的危害,急需加强对其监测。高分辨气相色谱-高分辨质谱联用检测(high resolution chromatography combined with high-resolution mass spectrometry, HRGC/HRMS)被认为是二恶英定量检测的标准方法。但该方法检测费用昂贵,费时,因此快速、经济和能反映DLCs总体机体效应的生物检测方法显得十分必要。本研究基于DLCs的作用机制,利用介导DLCs效应的芳香烃受体(arl hydrocarbon receptor, AhR)建立了一种新的DLCs检测生物技术,称为结合保护PCR分析方法(Binding Protection Mediated Polymerase Chain Reaction , BPM-PCR)。同时,针对BPM-PCR方法而建立了索氏提取-固相萃取-芳烃羟化酶降解的样品前处理方法。本研究分为二个部分:一、索氏提取-固相萃取-芳烃羟化酶降解样品前处理方法建立目的:本部分依据BPM-PCR方法而建立一种新的二恶英样品前处理方法。方法:用索氏提取、固相萃取处理和净化飞灰样品,将提取液分成两份(样品1和样品2),样品1用高压液相-荧光检测(激发波长246nm;发射波长431nm)准确测定飞灰样品中苯并[a]芘含量,飞灰中苯并[a]芘含量为1.52ug/g;样品2用芳烃羟化酶来降解样品中苯并[a]芘,再用高效液相-荧光检测苯并[a]芘含量。本部分研究也对实验条件进行了优化。结果:在温度为28度,时间为30分钟条件下,垃圾焚烧炉飞灰中苯并[a]芘降解达85%以上。结论:索氏提取-固相萃取-芳烃羟化酶降解具有快速、经济、简便的特点,是一种新颖而实用的二恶英样品前处理方法。二、结合保护PCR分析方法检测环境样本中二恶英类化合物目的:利用BPM-PCR检测环境样本(焚烧炉飞灰)中的DLCs的毒性当量(TEQs)。方法:将2g两份飞灰样本经过丙酮索氏抽提、固相萃取、芳烃羟化酶降解等步骤的前处理后,溶于500μl二甲基亚砜(DMSO),然后采用BPM-PCR检测其中的DLCs的毒性当量(TEQs)。结果与高分辨气相色谱-质谱联用技术(HRGC/HRMS)检测结果相比较。结果:对稀释1000倍的飞灰样本提取物检测得到对应的TCDD浓度分别为3.517×10-11mol/L和4.022×10-10 mol/L,换算得到的样本TEQ值分别为1.133ng/g和12.952ng/g,是根据HRGC/HRMS检测结果估算出来的TEQ值的1.42倍和2.13倍。BPM-PCR检测TEQ值略高于HRGC/HRMS检测结果,但在同一个数量级上。结论:利用索氏提取、固相萃取、芳烃羟化酶降解进行样品前处理,BPM-PCR进行检测可以快速地用于实际样本的定性与定量检测,结果与标准化学方法具有很好的可比性。总之,利用索氏提取-固相萃取-芳烃羟化酶降解进行样品前处理,用BPM-PCR进行检测,是一种颇具前景的有效的二恶英检测方法,它具有很高的灵敏性、特异性与稳定性,与化学方法结果也有很好的一致性,同时它又具备简便、快速和经济的特点,特别适用于进行二恶英样本的大规模筛选。