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木质素是一种广泛存在于自然界中的有机高分子化合物,其降解已成为地球上碳素循环的限速步骤。木素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)是木质素降解过程中起关键作用的酶。一直以来,木素过氧化物酶的提纯方法主要是盐析沉淀,但是效果不明显。逆胶束萃取技术是一种新型的生物分离纯化技术,它具有操作简单、成本低、萃取效率高、萃取条件温和和对环境无二次污染等优点,已逐步被应用于酶的分离及纯化。本研究分三个部分对木素过氧化物酶的生产及纯化进行了研究。第一部分是对黄孢原毛平革菌产木素过氧化物酶的发酵条件进行优化研究,考察了方案一和方案二中初始pH值及装液量对产酶量的影响。研究结果表明:初始pH值为4.5时,产酶量最高。随着装液量的增多,木素过氧化物酶的酶活不断增大。在方案一和方案二中,分别在装液量为100mL、60mL时产酶量达到最大值。在最优培养条件下,两种方案中木素过氧化物酶的酶活分别为0.120U/mL及0.110U/mL,前者较后者占优势。第二部分主要研究逆胶束体系萃取木素过氧化物酶的前萃过程中离子种类及浓度、表面活性剂浓度、水相pH值及振荡时间对萃取效率的影响。研究显示,在鼠李糖脂(RL)构建的逆胶束中,阳离子K~+对萃取率的影响大于Na~+。通过实验得出最佳前萃条件为:RL及KCl的浓度为2.75mmol/L、0.04mol/L,pH值为3.0,振荡时间为30min。在该条件下,LiP酶活回收率为93%,纯化倍数为2.9。第三部分主要研究逆胶束体系萃取木素过氧化物酶的后萃过程中离子浓度、水相pH值及乙醇加量对萃取效率的影响。通过研究发现后萃过程中加入乙醇可提高酶活回收率及纯化倍数,使萃取之后更加容易分相。通过实验得出最佳后萃条件为:KCl的浓度为0.5mol/L,pH值为6.0,乙醇加量为8%,在该条件下,纯化倍数为3.2。SDS-PAGE电泳分析结果进一步证实了木素过氧化物酶的纯化效果较好。