利用自剪切方法研究SARS-CoV 3CL蛋白酶的底物特异性

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pengtao0615
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SARS病毒是一种冠状病毒,与其它冠状病毒具有高度类似的分子生物学特征。冠状病毒基因组都编码一个3CL蛋白酶,负责对基因组的表达产物进行翻译后加工;同时,该蛋白酶还可能参与了病毒-宿主细胞之间的相互作用。因此,3CL蛋白酶被看作是抗病毒药物设计的重要靶点。SARS3CL蛋白酶在体外的(invitro)的结构与功能、催化机理等方面已经有了大量研究,但是对于它在宿主细胞内的定位,与细胞信号通路重要分子的作用等研究还需要进一步深入。本文以SARS3CL蛋白酶多克隆抗体的制备及纯化为主要研究内容,希望能够为体内(invivo)进一步的研究打下基础。 我们在大肠杆菌中表达了重组的SARS-CoV3CL蛋白酶,纯化后作为抗原免疫新西兰大白兔,制备了兔抗SARS-CoV3CL蛋白酶多克隆抗体。在此基础上,我们摸索了一系列条件,成功制备了3CL蛋白抗原偶联柱,对获得的兔抗血清进行了纯化,得到特异性较强的抗体。另外,使用纯化后的抗体,我们改进了以前设计的SARS3CL蛋白酶自剪切活力测定方法。Western-Blot的结果验证了我们以前通过SDS-PAGE获得的SARS3CL蛋白酶底物特异性的一些结果,很大程度上增强了数据的说服性。为3CL蛋白酶的抑制剂药物设计提供了有用的信息。
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