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目的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,简称HCV)感染是当前危害人类健康的重要传染病之一,目前除干扰素联合利巴韦林外尚无有效预防和治疗手段。因此,寻找其他治疗途径,预防和清除HCV的持续感染很有必要。而将编码HCV抗原的外源基因导入机体诱导产生特异性T细胞免疫反应的HCV新型疫苗目前正在受到人们的重视。以重组复制缺陷型腺病毒(replication-deficient recombinant adenovirus,rAd)为载体的疫苗,能模拟天然病毒有效地将外源基因导入宿主细胞内并使之高效表达,诱导机体产生针对目的抗原的免疫应答。为此,我们利用AdMaxTM腺病毒包装系统构建可表达HCV核心抗原Core的HCV重组腺病毒pAd-Core,并观察其免疫小鼠后,诱导机体产生特异性免疫应答的能力,为进一步研究防止HCV感染的基因疫苗和基因治疗奠定基础。方法RT-PCR法从丙型肝炎患者血清中扩增出HCV Core基因,定向克隆到重组腺病毒AdMaxTM系统的穿梭质粒pDC315的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-Core,在脂质体介导下与腺病毒基因组骨架质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染至HEK293细胞,通过同源重组包装产生复制缺陷型重组腺病毒pAd-Core;经HEK293细胞扩增后,离子交换柱层析法纯化病毒,测定病毒颗粒数和滴度;利用重组腺病毒体外感染人肝癌细胞株HepG2,经免疫印迹(Western Blot)方法检测目的蛋白的表达,通过酶联免疫吸附试验(enzyme 1inked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫小鼠血清抗体水平,酶联免疫斑点技术(enzyme-linked immunosorbent spot ,ELISPOT)检测免疫小鼠特异性T淋巴细胞免疫反应。结果重组腺病毒pAd-Core经PCR及序列测定证实Core基因插入正确,在HEK293细胞中具有良好的感染性;扩增纯化后,重组腺病毒的比活性可达3.42IU/100VP,单细胞产量可达2.63×104VP/cell;Western Blot检测结果表明pAd-Core在HepG2细胞可稳定表达目的蛋白,免疫小鼠后可刺激机体产生特异性体液免疫应答和细胞免疫应答.结论成功构建了表达HCV核心抗原Core的HCV重组腺病毒pAd-Core,该重组腺病毒可在人肝癌细胞株HepG2细胞内稳定表达目的蛋白,并且能够诱导机体产生有效的体液免疫应答和细胞免疫应答,具有成为丙肝疫苗的发展潜力。