【摘 要】
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本研究旨在探寻农杆菌介导草地早熟禾不同受体材料的转基因方法,分别采用以农杆菌侵染草地早熟禾胚性愈伤组织和农杆菌浸种法两种,通过两个植物二元表达载体(pTCK303-PpGBF1、pTCK303-PpGAMT1)转入两个外源基因,获得了转基因植株。对这两种遗传转化方法进行详细比较,实验主要的研究成果如下:1、在农杆菌浸种法转化草地早熟禾成熟种子的实验中,使用重悬后OD 600为0.9的菌液,加入三种
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本研究旨在探寻农杆菌介导草地早熟禾不同受体材料的转基因方法,分别采用以农杆菌侵染草地早熟禾胚性愈伤组织和农杆菌浸种法两种,通过两个植物二元表达载体(pTCK303-PpGBF1、pTCK303-PpGAMT1)转入两个外源基因,获得了转基因植株。对这两种遗传转化方法进行详细比较,实验主要的研究成果如下:1、在农杆菌浸种法转化草地早熟禾成熟种子的实验中,使用重悬后OD 600为0.9的菌液,加入三种不同的侵染受体真空处理3min,100rpm低速摇床震荡10min,转移到垫在培养皿里的湿润滤纸上黑暗培养3d。在滤纸上用筛选液筛选30d,移栽绿苗入土,壮苗30d后提取总DNA进行PCR鉴定。结果显示,侵染剪掉新芽的种子,农杆菌转化的PCR鉴定阳性率较高。PCR 阳性植株共39株,转化周期为3个月。2、在以早熟禾胚性愈伤组织为转化受体的转化研究中,得出OD 600为0.3,侵染时间为15min,和OD 600为0.6,侵染时间为10min,的组合侵染效果最好,可观察到侵染后愈伤组织有新生的组织长出,且无农杆菌过度生长的情况,最终得到转基因阳性植株2株,转化周期为8个月。本研究构建了草地早熟禾巴润的农杆菌介导胚性愈伤的转化体系,探索了对农杆菌浸种法在草地早熟禾的可能性。实验表明浸种法可以缩短转化时间,对本领域的研究具有一定的价值。
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