卵巢癌是妇女第五大癌症死亡原因,是妇科癌症首要死亡原因,一生当中大约每58个妇女就有一个患卵巢癌。由于卵巢位于人体内部,卵巢癌早期无明显症状,发现时多已为晚期。主要采用手术切除及顺铂联合紫杉醇进行化疗。细胞减灭术提高晚期患者生存率的作用有限,而化疗副作用很大,对于Ⅲ、Ⅳ期的病人在一线治疗后平均存活期大约为18个月。一些晚期患者由于身体素质差,不能耐受化疗。因此,临床上需要更好的辅助治疗方法,延缓复发和提高卵巢癌患者的生存率。过继免疫治疗作为肿瘤生物治疗的一种模式,通过输注免疫活性细胞以增强肿瘤患者的免疫功能,为晚期卵巢癌患者,尤其是复发的卵巢癌患者及身体素质差,不能耐受化疗的患者提供了新的治疗途径。人类细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer,CIK),是体外由不同的细胞因子如CD3单克隆抗体,IL-2,IL-1和γ-干扰素等诱导的免疫效应细胞,大量实验研究及临床试验表明,CIK细胞作为一种过继免疫治疗因子能够有效抑制和杀伤肿瘤细胞,与手术或放、化疗结合,可以防止癌的扩散和复发。但CIK细胞与中药相结合抗肿瘤的研究,国内外鲜有报道。姜黄素(Curcumin,Cur)是从姜科植物姜黄的根茎中提取的有效成分之一,有广泛的药用价值,抗癌是其主要的作用之一。本研究通过观察CIK细胞联合Cur对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用及对细胞凋亡的影响,探讨二者联和使用是否具有协同抗肿瘤作用,从而强化CIK细胞作为过继免疫治疗的优势,并探讨其可能的作用机制,为卵巢癌细胞的免疫治疗及中药治疗提供实验研究,为卵巢癌的综合治疗提供一个新的治疗思路,为进一步临床应用奠定基础。方法：首先诱导脐血CIK细胞,将SKOV3细胞随机分为Cur组、CIK细胞组、Cur联合CIK细胞组,MTT法测定各组细胞的增殖抑制率,并进行联合应用效应计算；电镜下观察各组细胞凋亡形态,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR检测各个给药组对SKOV3细胞FAS,FADD,CASP3mRNA表达的影响,Weston blot检测Cur作用后卵巢癌细胞表面Fas表达及CIK表面FasL的表达,MTT法检测抗FasL单克隆抗体对CIK细胞及Cur联合CIK细胞对卵巢癌细胞增殖抑制率的影响。结果：(1)实验中选择较低浓度的CIK与Cur,其单独作用于SKOV3细胞,抑制率均较低,而二者联合应用后能明显促进对增殖的抑制,且随着药物浓度及效耙比增加及作用时间的延长,抑制率也逐渐增加,即呈时间和浓度依赖关系。在效靶比为12.5：1,Cur浓度为20μmol·L-1时,作用48小时,单独应用的抑制率分别为48.7%及41.9%,而二者联合应用后抑制率达到76.2%,为单独应用的1.6倍及1.8倍。且联合应用效应Q值显示：Cur与CIK细胞合用作用于SKOV3细胞后Q值均大于或等于1.2,进一步证明二者合用具有协同抗肿瘤效应。(2)透射电镜显示：对照组卵巢癌细胞大小不等,细胞表面可见少量微绒毛,可见细胞分裂相和多核巨细胞。而各个给药组作用24h后,均呈现典型的细胞凋亡的形态学改变,Cur联合CIK组细胞凋亡的形态学改变最明显,Cur组细胞大小不等,胞质内多见电子致密物,部分细胞线粒体和粗面内质网成泡状改变,胞质内可见空泡结构,核内特染色质增多,成块状；CIK组细胞大小不等,细胞膜微绒毛减少,少量细胞膜有破损,胞质内可见较多的空泡结构和电子致密物,线粒体空泡样改变；Cur联合CIK组细胞大小不等,细胞数明显减少,细胞膜有破损,少见多型核巨细胞,胞质内可见大量的空泡结构或电子致密物,线粒体脊断裂或呈空泡样改变,细胞核固缩。表明Cur与CIK联用具有明显诱导SKOV3细胞凋亡的作用。(3) RT-PCR检测CIK细胞、Cur、及Cur联合CIK对SKOV3细胞内Fas的mRNA表达影响。结果显示,与对照组相比,DMSO和Cur组对Fas的mRNA表达无影响,而CIK细胞组和Cur联合CIK组能够促进FAS的mRNA表达(P<0.05),表达阳性率分别为对照组的120%及186%；Cur联合CIK组FAS的mRNA表达明显增加,为CIK细胞组的1.55(186/120)倍；与对照组相比,各个给药组对FADD的mRNA表达无影响；与对照组相比,DMSO对Caspase3的mRNA表达无影响,而Cur组、CIK细胞组和Cur联合CIK组均能够促进Caspase3的mRNA表达(P<0.05),表达阳性率分别为对照组的115%、205%、302%,且Cur联合CIK组Caspase3的mRNA表达明显增加,分别为Cur组及CIK细胞组的2.62(302/115)倍及1.47(302/205)倍。(4) Weston blot检测Cur作用后卵巢癌细胞表面Fas表达。结果显示,与对照组相比,DMSO对Fas蛋白表达无影响,而5、10和20μmol·L-1 Cur能够促进SKOV3细胞Fas蛋白表达(P<0.05)。表达阳性率分别为对照组的168%,253%及249%。(5) Weston blot检测Cur对CIK细胞膜FasL蛋白表达的影响。结果显示,与对照组相比,DMSO对FasL蛋白表达无影响,而5、10和20μmol·L-1 Cur能够促进CIK细胞膜FasL蛋白表达(P<0.05),表达阳性率分别为对照组的139%,142%及138%。(6)MTT检测抗FasL单克隆抗体对卵巢癌细胞增殖抑制率的影响。通过FasL抗体预先孵育,阻断了Fas/FasL途径,CIK组和Cur联合CIK组FasL抗体预先孵育能够明显抑制对SKOV3细胞的增殖抑制作用。抑制率分别由31.4%降至21.1%,69.8%降至51.6%。结论：(1)脐血来源的CIK细胞体外增殖快,单个核细胞提取率高,对卵巢癌SKOV3细胞杀伤活性强。可方便地用于临床治疗。(2)Cur与CIK细胞联合使用,作用于卵巢癌SKOV3细胞,体外具有协同抗肿瘤效应。作为一种辅助治疗手段,为肿瘤患者,尤其是复发的及不能耐受化疗的晚期肿瘤患者带来了希望。(3)Cur与CIK细胞联合使用,诱导SKOV3细胞凋亡作用增强,表明二者合用具有较好的肿瘤治疗效果,有希望成为发展前景良好的综合治疗方法。(4)Cur与CIK细胞联合使用,诱导卵巢癌细胞凋亡的机制可能为Cur促进SKOV3细胞表面Fas表达增强,CIK细胞表面FasL表达增强,从而使SKOV3细胞内Fas表达增加,最终使caspase3表达增高。为二者的进一步临床应用提供了理论依据。本研究将Cur与CIK细胞联合使用,作用于卵巢癌SKOV3细胞,增强了对SKOV3细胞的增殖抑制作用,强化了CIK细胞作为过继免疫治疗的优势,为晚期卵巢癌患者,尤其是复发的卵巢癌患者及身体素质差,不能耐受化疗的患者提供了新的治疗途径。为卵巢癌的综合治疗提供一个新的治疗思路：在卵巢癌治疗的具体方案设计上可采取多种方法联合应用综合治疗。