多西紫杉醇核酸适配体的高效筛选及其特性的初步考察

来源 :湖南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cyscwbr
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
核酸适配体作为一种与抗体功能相似的新型配体,它们在疾病检测、新药研发、临床治疗及基因表达调控等多个领域具有良好的应用前景,成为近年来研究的热点之一。核酸适配体具有靶分子范围广、稳定性好、合成简单、易于修饰等特点。小分子目标物是一类很重要的靶分子,核酸适配体对小分子的特异性识别在医药、农业、食品安全和环境监测等方面都有着广泛的应用前景。但是小分子核酸适配体的筛选面临费时费力、成本高、筛选结果不理想等技术瓶颈,制约了它们的发展和应用。与此同时,微流控芯片作为一种新型的化学、生物分析检测平台得到了快速发展。因其具有快速、高效、高通量、低成本、低样品量、微型化、集成化等优点,特别是在分离领域具有独特的优势,所以越来越多地被用于核酸适配体的筛选。本论文以多西紫杉醇(DOC)作为筛选的靶分子,采用固定文库的筛选方法,同时搭建微流控芯片作为筛选平台,发展了一种简便、高效、易于操作的筛选小分子核酸适配体的方法,并对筛选得到的核酸适配体的特性进行了初步考察。研究内容包括:(1)为了简化整个筛选流程、提高筛选效率,设计了一种操作简便,无需外加分离装置的蛇形通道微流控芯片。首先在芯片表面利用生物素化捕获探针通过互补杂交的方式将DNA文库固定于通道表面,再通入目标物多西紫杉醇的溶液,与目标物结合的DNA链将被洗脱下来.,并在芯片出口处被收集。经过九轮的筛选,并对富集度较高的第五、六、七轮文库进行了TA克隆测序。(2)通过序列分析和亲和力、特异性的考察,获得了两条与多西紫杉醇亲和力和特异性较好的核酸适配体DOC6-5和DOC7-38,其解离常数分别为32nmol/L和66nmol/L,并初步推测核酸适配体有两个位点可与多西紫杉醇结合。此外,还考察了不同轮数的DNA文库对多西紫杉醇的增溶作用,富集度高的文库增溶作用比较明显,筛选出的核酸适配体DOC6-5可使多西紫杉醇的溶解度从5μg/mL增加到20μg/mL,且DOC6-5与多西紫杉醇复合物在水溶液中能够稳定存在。通过MTT实验和PI染色实验分别考察了DOC6-5与多西紫杉醇复合物对细胞的杀伤能力,结果表明复合物对A549细胞的杀伤能力比同浓度的多西紫杉醇效果好,半致死量(IC50)为1.49μg/mL。
其他文献
河北大学2013年以来创新运用微电影法教学,思政课教师们组织大学生根据教学内容拍摄了3500多部微电影,引导大学生在拍摄影片过程中创造幸福,在欣赏影片过程中体验幸福。2018
<正> 对科学技术是第一生产力这一理论观点,目前一些人还存在着种种疑虑。其实,这些疑虑几乎都与传统的生产力要素观点有关。传统的生产力要素观点并没有反映马克思生产力要
<正>日本"青春18"通票,一张11,500日元(约合人民币700元),可以使用五次,每次能在一天内随意乘坐普通列车和快速列车,可以一个人使用五天,也可以和朋友一起使用五次。记忆中"
班主任在日常管理工作中,应用传统与经验的学生管理模式,远远满足不了21世纪的教育发展要求。在实行素质教育,以人为本,重视个性充分发展的教育大环境下,面对感情丰富,单纯幼
提高县域经济发展水平对加快社会主义新农村建设、全面建成小康社会战略具有深远意义。河北省地接京津,但各种原因综合导致河北县域经济发展滞后,而京津冀一体化的提出给河北
分析地塞米松结合替硝唑治疗瘘管型慢性根尖周炎的临床疗效。选取收治的86例瘘管型慢性根尖周炎患者为研究对象,随机分成观察组和对照组各43例,对照组采取传统根管治疗药物治
破产作为一种经济现象,破产法律制度起源于自然人破产法律制度,自然人破产法律制度在破产法律制度中占有十分重要的地位。近年来破产制度的重要性日益凸显。本文以自然人破产
一个充满神秘的梦──毕勤诠释的李姆斯基-科萨柯夫的《天方夜谭》石振宇俄国民族乐派的大师李姆斯基一科萨柯夫的《天方夜谭》(舍赫拉查达)自1888年诞生以来已经成了家喻户晓的名曲
<正>自2007年欧洲鼻窦炎和鼻息肉立场文件(EPOS2007版)出版以来,慢性鼻窦炎(chronic rhinosinusitis,CRS)临床诊疗的重要随机对照试验又陆续发表,这些获得的循证医学证据加深
多个特异由肾小球足细胞表达的蛋白分子不但由足细胞特异表达,而且对维系正常的足细胞形态和功能起着至关重要的作用。本文就这些足细胞相关分子与足突融合的研究作一介绍,足