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研究背景大量证据证明动脉粥样硬化是一种在发病起始和整个过程中都伴有免疫反应的炎症性疾病。固有免疫反应是机体的第一道防线,它识别高度保守的病原相关分子模式。在这第一道防线中,识别病原相关分子模式的受体中主要有Toll样受体和清道夫受体。研究表明,TLR2和TLR4在人的动脉粥样硬化斑块中的表达显著提高。TLR2和TLR4在人动脉粥样硬化病变中与炎症的激活相关,他们促发了动脉粥样硬化发病过程中的固有免疫反应。动脉粥样硬化是以脂质和炎症细胞在血管壁的堆积为特点的。当循环中的脂蛋白堆积,聚集并在血管内膜下被修饰后,引起并推进动脉粥样硬化的发展。这导致炎症细胞的浸润和巨噬细胞对脂质摄取的失调。研究表明TLR2和TLR4受到配体的刺激以后可以引发多种细胞因子和炎症分子的合成和释放,如MCP-1,IL-8,粘附分子等。其中有很多重要的分子与动脉粥样硬化起始过程都是密切相关的。另外,在动脉粥样硬化的发病机制当中,脂蛋白的作用已经比较明确,但是免疫反应在其中的作用仍然不清楚。因此,本研究意在探讨修饰的脂蛋白对内皮细胞TLR2和TLR4表达的影响,以及内皮细胞TLR2和TLR4对单核细胞趋化的影响。目的观察oxLDL,oxHDL对ECV304人脐静脉内皮细胞膜上TLR2、TLR4受体表达的影响,以及人脐静脉内皮细胞TLR2、TLR4受到这两种脂蛋白刺激后对THP-1趋化作用的改变。方法每次实验前24小时,给ECV304内皮细胞换新鲜培养基培养后加处理因素。用不同浓度(0 mg/L,25 mg/L,50 mg/L,100 mg/L)的oxLDL和oxHDL孵育ECV304内皮细胞24小时后,用RT-PCR的方法检测细胞TLR2和TLR4 mRNA表达的水平,筛选出最适的处理浓度。用该浓度处理ECV304内皮细胞24小时后,用RT-PCR的方法检测细胞TLR2和TLR4 mRNA表达的水平,用Western blot的方法检测TLR2和TLR4蛋白表达水平。将ECV304内皮细胞种于Transwell下室后,用最适浓度的oxLDL和oxHDL处理内皮细胞24小时,然后在上室种THP-1单核细胞,计数下室的THP-1单核细胞。将ECV304内皮细胞种于Transwell下室后,用最适浓度的oxLDL和oxHDL处理内皮细胞24小时,用5μmol/LEGCG孵育内皮细胞1小时,抑制其TLRs信号后,再将THP-1细胞种到上室然后,计数下室的THP-1单核细胞,观察THP-1单核细胞趋化的情况。结果用不同浓度的(0 mg/L,25 mg/L,50 mg/L,100 mg/L)的oxLDL和oxHDL孵育ECV304内皮细胞24小时后,ECV304内皮细胞上TLR2和TLR4 mRNA表达随处理浓度的升高增强。在100 mg/L oxLDL和100 mg/L oxHDL的作用下,ECV304内皮细胞上TLR2和TLR4 mRNA和蛋白表达水平明显上调。将ECV304内皮细胞种植到transwell下室并用oxLDL和oxHDL处理细胞后, ECV304内皮细胞对THP-1单核细胞的趋化作用明显增强。当用5μmol/L EGCG抑制TLRs信号途径后,内皮细胞对THP-1单核细胞的这种趋化作用却明显减弱。结论(1)在人ECV304内皮细胞上存在有TLR2和TLR4基因的表达;(2) oxLDL和oxHDL可以上调ECV304内皮细胞TLR2和TLR4的mRNA和蛋白质的表达;(3) oxLDL和oxHDL刺激ECV304内皮细胞上TLR2和TLR4表达以后可以促进人ECV304内皮细胞对人THP-1单核细胞的趋化作用,并且这一作用可以被EGCG所抑制。