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目的:(1)采用原代组织块培养法建立人牙周膜成纤维细胞的体外模型。(2)观察不同浓度LPS干预后人牙周膜成纤维细胞HSP27的表达。(3)观察不同浓度雌激素对LPS致炎后人牙周膜成纤维细胞HSP27表达的影响,为细胞因子在牙周病中发挥的作用提供实验依据。方法:(1)建立人牙周膜成纤维细胞体外模型采用原代组织块培养法,并对其进行免疫组织化学鉴定即抗波形丝蛋白抗体和抗角蛋白抗体;(2)选取生长活力旺盛的5-8代细胞,分别加入含0μg/ml、0.1μg/ml、1μg/ml、10μg/ml、50μg/ml、100μg/ml的LPS进行干预,24h后采用免疫组织化学方法检测HSP27在细胞中的表达情况;同时确定使人牙周膜成纤维细胞表达HSP27最强时LPS的浓度;(3)重新选取5-8代细胞,分别加入含100μg/ml的LPS,同时分别加入含0mol/L、10-9mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L的17β-雌二醇,24h后采用SP法检测HSP27在HPLFs中的表达情况;(4)利用图像分析系统,对染色结果进行图像和数据的收集,采用单因素方差分析法、组间比较采用LSD法进行统计分析。结果:(1)成功建立了人牙周膜成纤维细胞的体外模型,倒置显微镜下观察细胞呈梭形或有数个胞质突的星形,排列有极性,呈旋涡状或放射状,经鉴定染色结果显示,HPLFs为抗角蛋白阴性,抗波形丝蛋白阳性,为成纤维样细胞的生物学特点,5代后细胞生长旺盛,而8代后细胞增殖缓慢;(2)经LPS干预HPLFs后,免疫组织化学方法检测HSP27在细胞中的表达结果显示:正常HPLFs中HSP27呈阴性或弱阳性表达,经LPS干预后HSP27在胞浆中呈阳性表达,且随着LPS干预浓度的升高,HSP27的表达呈现递增的趋势;(3)用免疫组织化学方法检测17β-雌二醇对致炎后HPLFs中HSP27表达的影响:随着17β-雌二醇浓度的升高,使得致炎后HPLFs中HSP27的表达呈现递减的趋势。结论:(1)原代组织块培养法操作简单、有较高的成功率,成功建立的人牙周膜成纤维细胞体外模型为后续的实验提供了基础;(2)经LPS诱导后HPLFs中HSP27呈阳性表达,且其表达强度与LPS诱导浓度呈正相关关系,表明HSP27参与了牙周组织炎症的发生发展;(3)雌激素可有效抑制致炎后人牙周膜成纤维细胞中HSP27的表达,表明雌激素在控制牙周炎症过程中可发挥一定的调控作用,为雌激素应用于牙周病的诊治提供了实验依据。