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目的:脉络膜黑色素瘤（choroidal melanoma,CM）是成年人中最常见的葡萄膜恶性肿瘤,因其有病情复杂、恶性程度高、易侵袭转移等特点,故预后极差。深入研究脉络膜黑色素瘤的发病机制,对降低其发生率和死亡率有重要意义。近年来的研究已证实,微小RNA（mi RNA）与包括脉络膜黑色素瘤在内的多种肿瘤的发生及发展有关,能够影响肿瘤细胞的生长、分化、转移、凋亡等生物学行为。此外,微小染色体维持蛋白3（minichromosome maintenance protein 3,MCM3）是DNA复制前复合物的组成部分之一,参与DNA复制的起始延伸和基因损伤的修复,并且在肿瘤细胞的生长、增殖和侵袭中起重要作用。由此推测mi RNA可能与MCM3共同参与调节脉络膜黑色素瘤细胞的生物学进程,本课题将研究mi R-147a、MCM3对脉络膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并探究mi R-147a是否通过靶向调控MCM3发挥其生物学作用。方法:1、探究mi R-147a对脉络膜黑色素瘤细胞生物学功能的影响采用脂质体转染人眼脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞,设置mi R-NC,mi R-147a mimics（模拟物）,inhibitor-NC,mi R-147a inhibitor（抑制物）四组。采用EDU染色法检测各组细胞增殖情况;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭情况。2、探究mi R-147a靶向结合MCM3并调控其表达Targetscan7.2生物信息学网站预测分析mi R-147a下游靶基因;双荧光素酶报告基因实验验证mi R-147a与MCM3 m RNA的3’UTR区域的靶向结合关系;蛋白质印迹法（Western Blot）检测靶基因MCM3蛋白表达含量。3、探究敲减MCM3对脉络膜黑色素瘤细胞生物学功能的影响使用小RNA干扰技术,敲减脉络膜黑色素瘤MUM-2B细胞中的MCM3基因,设置NC RNA和MCM3-si RNA组,Western Blot验证MCM3敲减效率,EDU染色实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞迁移、侵袭。4、探究MCM3对PI3K/AKT信号通路相关蛋白的影响通过Western Blot实验,对比检测对照组和MCM3敲减组细胞中P110α、磷酸化AKT、总AKT的蛋白表达情况。结果:1、EDU结果显示上调mi R-147a,MUM-2B细胞增殖数明显低于对照组（t=5.11,P<0.01）,相反下调mi R-147a,细胞增殖数高于对照组（t=3.43,P<0.05）;Transwell结果表明上调mi R-147a,MUM-2B细胞迁移数和侵袭数均低于对照组（t=5.90,P<0.01;t=3.05,P<0.05）,下调mi R-147a,细胞迁移数和侵袭数均高于对照组（t=8.12,P<0.01;t=4.52,P<0.05）。2、mi R-147a与MCM3 m RNA的3’UTR区域存在互补序列;双荧光素酶实验显示与对照组（转染mi R-NC和MCM3 3’UTR野生型质粒）相比,转染mi R-147a和MCM3 3’UTR野生型质粒的细胞相对荧光素酶活性明显下降（t=15.10,P<0.001）,而转染mi R-NC/mi R-147a和MCM3 3’UTR突变型质粒的两组细胞荧光素酶活性无明显差别（t=0.25,P=0.82）;Western Blot实验结果证明上调mi R-147a,MUM-2B细胞中MCM3蛋白含量下降（t=4.06,P<0.05）,下调mi R-147a,细胞中MCM3蛋白含量上升（t=8.24,P<0.01）。3、相比对照组,Western Blot结果表明,MCM3-si RNA使脉络膜黑色素瘤细胞中MCM3蛋白表达量明显降低（t=5.12,P<0.01）;EDU结果表明,敲减MCM3组的MUM-2B细胞增殖能力显著降低（t=7.30,P<0.01）;Transwell结果表明,敲减MCM3组的MUM-2B细胞迁移、侵袭能力均降低（t=11.57,P<0.001;t=5.98,P<0.01）。4、相比对照组,敲减MCM3组的MUM-2B细胞中P110α和磷酸化AKT蛋白含量减少（t=6.48,P<0.01;t=5.05,P<0.01）,而两组间总的AKT含量无明显变化（t=0.27,P=0.80）。结论:1、mi R-147a能够抑制脉络膜黑色素瘤细胞恶性增殖、迁移和侵袭;2、mi R-147a与MCM3 m RNA 3’UTR区靶向结合并抑制MCM3蛋白表达;3、敲减MCM3亦可抑制脉络膜黑色素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭,并且这种调控作用可能与抑制了PI3K/AKT信号通路有关。