背景和目的:口腔癌是头颈部恶性肿瘤中最常见的肿瘤之一,口腔鳞状细胞癌约占口腔恶性肿瘤的90%。作为全球第六大常见癌症,口腔鳞状细胞癌死亡率高,治愈率低。如今虽然在预防和治疗口腔癌方面取得了进展,但5年生存率仍然保持在50%左右。口腔肿瘤是一种异质性肿瘤,具有多种不同的病理组织和分子特征。近来,在口腔癌的发展中发现基因和表现遗传的改变。基因启动子的高甲基化可能导致抑癌基因的沉默,而不改变基因序列。研究发现Ras相关区域家族1A基因启动子的高甲基化对基因沉默起了很大的作用,从而导致肿瘤的发生。许多不同的癌症都报道了Ras相关区域家族1A基因的高甲基化,并被描述为一个良好的预后指标。对Ras相关区域家族1A启动子高甲基化与口腔癌发病风险之间的关系进行的几项研究表明,结果不一致。此外,其他研究的结果表明,E-钙粘蛋白基因和维甲酸受体β基因启动子甲基化的在口腔癌患者中发生频率非常高。因此,这三个发生异常甲基化的肿瘤抑制基因可能是早期发现和早期治疗口腔癌的良好生物标志物,然而,研究结果仍然不一致。为了进一步加强口腔癌的临床筛查、实验室诊断,改善临床治疗及术后的预后状态,并更新目前临床上口腔癌惯用的诊断和治疗方式,而做了本次系统评价以探索RASSF1A基因,RARβ基因和CDH1基因启动子甲基化与口腔癌发病风险的关联。方法:1.文献检索通过两位研究人员对PubMed、Science、Embase和中国知网(CNKI)数据库进行分别检索,筛选符合条件的文章。文献研究检索时间从各数据库收录的最早时间开始,截至2017年4月15日。中文检索的关键词为:“口腔癌”、“口腔肿瘤”、“口腔恶性肿瘤”、“口头癌”、“口腔鳞状细胞癌”、“唾腺癌”、“颊癌”、“口腔舌癌”“唾腺样囊性癌”、“口腔和咽癌”、“Ras相关区域家族1A基因”、“E-钙粘蛋白”、“维甲酸受体β”、“启动子甲基化”、“甲基化”;英文检索的关键词和医学主题词(MeSH):“oral cancer”、“oral tumor”、“oral carcinoma”、“oral squamous cell carcinoma”、“OSCC”、“Salivary Gland Carcinoma”、“Buccal Carcinoma”、“Salivary Adenoid Cystic Carcinoma”、“RASSF1A”、“CDH1”、“E-cadherin”、“RARβ”、“methylation”、and“hypermethylation”。同时,还检索了纳入文章的参考文献,以获得更多合格的研究。2.文献纳入与排除的标准(1)是评估RASSF1A基因,RARβ基因,CDH1基因启动子甲基化与口腔癌或口腔周围组织癌发病风险相关的研究;是包括基因甲基化频率数据的观察组和未有甲基化的病例对照组的个案研究或群体研究。(2)纳入研究的文献是基于人群的研究文献,动物实验的文献不纳入研究。(3)如果研究不符合下列标准,将被排除:没有关于RASSF1A基因,RARβ基因和CDH1基因的甲基化频率的相关数据或数据不完整的文章、重复数据的文章(如果不同的研究中出现重复数据,则选择最完整和最新的数据)、Meta分析和综述的文章、低质量研究的文章。(4)所有检索出的相关文章均由两名调查人员进行评估和选择。如果在评估和选择过程中出现争议,由第三位研究者介入讨论并帮助解决。3、提取数据和提取方法的质量评价两名调查人员分别提取出关于RASSF1A基因,RARβ基因,CDH1基因启动子甲基化的控制组与未甲基化的病例对照组与口腔癌和口腔周围组织癌发病风险的甲基化与未甲基化频率数据的文章,并从文章中提取以下信息:第一作者姓名、出版年份、人口种族、基因甲基化频率、基因未甲基化频率、疾病类型、基因甲基化检测方法、研究人群来源的国家。采用纽卡斯尔-渥太华量表进行文献质量评价,有甲基化频率数据的观察组和病例对照组的研究(4颗星)、存在可比性的组(2颗星)存在可比性且有明确暴露值的组(3颗星)的评价方法逐一进行评价。如果一项研究大于等于6颗星,则认为这项研究是高质量的,包含在本次系统评价中,未达到6颗星的研究将被排除。4、统计方法使用STATA 12.0软件(STATA Corporation,College Station,Texas,USA)进行统计分析。使用比值比(OR)、95%的可信区间(95%CI)评估RASSF1A基因、RARβ基因和CDH1基因启动子甲基化与口腔癌及口腔周围组织癌的发病风险的关联。所有P值均为双侧,P<0.05则认为差异有统计学意义。使用基于Q检验的卡方检验来检测研究的异质性。如果P<0.05或I~2>50%,说明存在显著的异质性,建立随机效应模型;否则,应用固定效应模型。此外,还进行了z检验,以确定池域强度的比值比。使用Egger’s和Begg’s检验,评估发表偏倚,比较结果差异的同时做了纳入研究的异质性和样本含量的正态性检验,以寻找影响发表偏倚检验功效的因素,如果P<0.05,则存在显著的发表偏倚。此外,通过对每项研究染色体缺失部分的逐个研究,进行敏感性分析,进一步检测总体的稳定性。在对CDH1启动子甲基化与口腔癌发生风险关联的Meta分析中,由于存在显著的异质性,进行了Meta回归分析,以探讨异质性的来源。结果:1、文献筛选结果在最初的检索中发现160篇可能相关的文章。排除不符合标准和重复的文章后,对余下75篇相关文献进行了评审和选择。通过阅读标题和摘要,其中20篇无关的文献被排除,保留了55篇文章。此外,全文共阅读了55篇文章,其中32篇文章没有包含相关的有效数据,被排除。最后,共计23篇文献、29项研究纳入本次系统评价,29项研究中12项研究是关于RASSF1A基因启动子甲基化与口腔癌发病风险的关联,4项是对RARβ基因启动子甲基化与口腔癌发病风险关联的研究,剩余13项是关于CDH1基因启动子甲基化与口腔癌发病风险关联的研究。此次评价中,所有的研究都36分,以保障研究的高质量。2、RASSF1A基因启动子甲基化和口腔癌发病风险的关联将12项RASSF1A基因甲基化的病例对照研究的数据汇集在一起,计算出RASSF1A基因启动子甲基化与口腔癌和口腔周围组织癌发病风险之间的关系。在研究结果的基础上,进行综合研究,结果表明,RASSF1A基因启动子甲基化与口腔癌发病风险有显著的相关性(OR=11.8,95%CI=6.14-22.66)。根据Q检验结果,研究中没有发现异质性(P=0.337,I~2=12.0%)。然后,根据口腔癌的分型进行亚群分析,结果表明,在口腔鳞状细胞癌(OSCC)和涎腺癌(SGC)中存在显著的差异性(OSCC,OR=6.78,95%CI=3.20-14.37;SGC,OR=18.51,95%CI=3.58-95.79)。3、RARβ基因和CDH1基因启动子甲基化和口腔癌发病风险的关联RARβ基因和CDH1基因启动子甲基化与口腔癌的发病风险有显著相关性(RARβOR=20.35,95%CI=5.64-73.39;CDH1,OR=13.46,95%CI=5.31-34.17)。在对CDH1基因甲基化的分析中发现,研究中存在显著的异质性(I~2=73.1%,P=0.000)。为了探究异质性的来源,进行一元回归分析,结果表明,种族可能是异质性的主要来源(P=0.028,95%CI=0.275-3.976)。在基于种族的亚组分析中,发现CDH1基因启动子的甲基化可能显著增加亚洲人患口腔癌的风险,但在白种人中不显著(亚洲人:OR=21.79,95%CI=8.66-54.82;高加索人:OR=2.57,95%CI=0.71-9.31)。然而,关于白种人CDH1基因启动子甲基化与口腔癌发病风险关联的研究只有三个,其结论有待进一步研究。4、RASSF1A基因启动子甲基化和舌肿瘤发病风险的关联研究发现RASSF1A基因启动子甲基化在舌肿瘤中的频率高于其他部位的肿瘤(RASSF1A,舌瘤对比口腔的其他部位肿瘤,未甲基化vs甲基化,OR=0.65,95%CI=0.44-0.98)。结论:RASSF1A基因、RARβ基因和CDH1基因启动子甲基化可能会大大增加患口腔癌的发病风险。